本發明屬於家畜病害檢測技術領域，具體涉及一種檢測豬場土壤中是否攜帶非洲豬瘟病毒的方法。

背景技術：

非洲豬瘟(African swine fever virus，ASFV)，是一種急性，發熱傳染性很高的濾過性病毒所引起的豬病，其特徵是發病過程短，但死亡率高達100％，臨床表現為發熱，皮膚髮紺，淋巴結，腎、胃腸粘膜明顯出血。

2018年8月3日—15日，中國在遼寧瀋陽、河南鄭州、江蘇連雲港3個相隔很遠的地區，接連發現3起非洲豬瘟疫情。8月19日，江蘇省連雲港市海州區某養殖場確診發生非洲豬瘟疫情，發病615頭，死亡88頭。8月24日，浙江省溫州市樂清市畜牧獸醫局報告，某養殖小區3個養殖戶的生豬發病430頭，死亡340頭。9月2日，安徽省宣城市宣州區發生生豬非洲豬瘟疫情。古泉鎮某養殖場存欄生豬285頭，死亡40頭。五星鄉某養殖場存欄生豬440頭，死亡94頭。9月17日，內蒙古第二個旗縣發生非洲豬瘟疫情，同時釋出了封鎖非洲豬瘟疫區的命令。1月23日9時，北京市房山區青龍湖鎮、琉璃河鎮各一個養殖場排查出非洲豬瘟疫情。2019年1月1日，黑龍江省綏化市明水縣發生非洲豬瘟疫情。2019年3月7日，廣西貴港一養殖場發生非洲豬瘟疫情。由於現在尚未有有效的非洲豬瘟疫苗和藥物，一旦發生疫情只能採取封閉、撲殺、無害化處理、消毒等處置措施，給廣大養殖戶帶來巨大的經濟損失。

非洲豬瘟病毒(ASFV)屬於非洲豬瘟病毒科，非洲豬瘟病毒屬，雙鏈DNA病毒。它是目前唯一的DNA蟲媒病毒。ASFV對乙醚及氯仿等脂溶劑敏感，對熱、腐敗、乾燥等的抵抗力較強。病毒可在56℃的環境下存活2小時、4℃下存活6個月、在乾燥的室溫環境下可存活2年，而在-20℃下幾乎可無限期的存活。在PH值範圍為3至10的環境下，病毒十分穩定。由於非洲豬瘟病毒的這一穩定特性，給豬場復產帶來嚴重挑戰，一旦消毒不徹底，豬場環境或土壤中存在存活病毒，復產後再次感染機率為100％。

通常對待疫情區的處理均會採用反覆清理、清洗、消毒、空置，這一系列措施能夠有效殺滅飼養場所表面的非洲豬瘟病毒，但土壤中的病毒無法得到有效處理，已經有資料表明，非洲豬瘟病毒可隨著水流、尿液、糞便等滲透到土壤中導致疫情傳播。因此在豬場復產前一旦土壤中存在未殺死的非洲豬瘟病毒，將對復產後的豬場帶來嚴重威脅，甚至再次感染造成損失。

因此如何準確確定飼養環境中是否含有非洲豬瘟病毒，何時解除疫區封鎖，合理把握復產時間對生豬養殖業具有重要意義，而目前尚沒有較好的方法可以直接檢測豬場環境尤其是土壤中的非洲豬瘟病毒，更沒有準確的方法可以合理把控發病後豬場的復產時間，疫區豬場復產全靠經驗與運氣。

技術實現要素：

針對上述技術問題，本發明旨在提供一種可以直接檢測豬場土壤中非洲豬瘟病毒的方法，以確定發病、清空並經清理、消毒後的豬場是否適合復產。該方法還可以有效排查豬場復產的風險性及風險來源，有針對性的對豬舍周邊、生產汙區、病死豬處理位置等高風險區域進行排查，並採取有針對性的處理方案。

為實現上述目的，本發明透過以下技術方案實現：

一種檢測豬場土壤中是否攜帶非洲豬瘟病毒的方法，包括將蚯蚓投放在豬舍周邊、生產汙區、病死豬處理位置、豬場進出入口的土壤中培養，之後再檢測蚯蚓體內是否攜帶非洲豬瘟病毒的步驟。

具體包括以下步驟：

(1)蚯蚓投放場地選擇與處理：選擇豬舍周邊、生產汙區、病死豬處理位置、豬場進出入口做為待檢測場所，用消毒處理後的純淨水澆透；

(2)蚯蚓投放：將蚯蚓投放至待檢測場所，之後用低功率紫外燈照射地面；

(3)蚯蚓回收：投放後培養3-5天，根據蚯蚓糞便位置，挖出蚯蚓，不同區域蚯蚓分開放置，並做好標記，蚯蚓回收數量大於投放總數量的70％；

(4)檢測：將回收的蚯蚓粉碎後取樣，採用熒光PCR方法檢測是否攜帶非洲豬瘟病毒，若非洲豬瘟病毒檢測呈陽性，表明消毒不徹底，對陽性區域繼續清理、消毒；若檢測非洲豬瘟病毒呈陰性，重複步驟(1)至步驟(4)2-4次，直至所有檢測呈陰性。

做為具體技術方案，步驟(1)中蚯蚓的投放數量為10-15條/m2。

做為優選技術方案，所述蚯蚓在投入待檢場所前需在非洲豬瘟病毒呈陰性的培養基中培養2-7天，投入前隨機抽檢蚯蚓中非洲豬瘟病毒2-3次，每次檢測結果呈陰性後方可投放。

做為優選技術方案，所述步驟(1)中低功率紫外燈照射時間為3-5min，紫外功率為10-20W。

做為具體技術方案，所述步驟(3)中蚯蚓投放後培養期間定期向投放區域中噴灑純淨水，保持土壤溼潤。

做為具體技術方案，在步驟(1)中蚯蚓投放之前將投放區域進行鬆土處理，以便於蚯蚓鑽入土壤內部。

做為具體技術方案，所述步驟(1)中的待檢測場所按3-10m2/塊分別編號。

做為具體技術方案，所述步驟(4)中蚯蚓的粉碎過程採用低溫研磨粉碎。

做為具體技術方案，所用蚯蚓為孵化10天之後尚未性成熟的蚯蚓。

該檢測方法可用於檢測豬場土壤中的病毒，包括豬瘟病毒、藍耳病毒、偽狂犬病毒、流行性腹瀉病毒、輪狀病毒等。

本發明可用於檢測非洲豬瘟疫情前後豬場周邊環境土壤中的非洲豬瘟病毒，提前防範風險或延遲豬場復產，能有效檢測出豬場及周邊土壤中的病毒，檢測方法簡單、高效，本發明具有以下優勢：

檢測效率高，準確性高

我的觀點是，一般豬的心上發紅不吃東西。，給豬打針的時候。針口會有大量流血。豬還吐出大量的飼料。飼料裡帶血，吐血的豬不到兩天就死掉了。病豬增多，懷疑可能是非洲豬瘟。要檢測了。我的經歷是這些。

你們怎麼看呢？

非洲豬瘟（英文名稱：African Swine fever，簡稱：ASF）是由非洲豬瘟病毒（英文名稱：African Swine fever virus，簡稱：ASFV）感染家豬和各種野豬（如非洲野豬、歐洲野豬等）而引起的一種急性、出血性、烈性傳染病。世界動物衛生組織（OIE）將其列為法定報告動物疫病，該病也是中國重點防範的一類動物疫情。其特徵是發病過程短，最急性和急性感染死亡率高達100%，臨床表現為發熱（達40～42℃），心跳加快，呼吸困難，部分咳嗽，眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物，皮膚髮紺，淋巴結、腎、胃腸粘膜明顯出血，非洲豬瘟臨床症狀與豬瘟症狀相似，只能依靠實驗室監測確診。

下面專家是對非洲豬瘟的防治提出的可靠方案！

場地及設施裝置消毒

消毒前準備

消毒前必須清除有機物、汙物、糞便、飼料、墊料等。

選擇合適的消毒藥品。

備有噴霧器、火焰噴射槍、消毒車輛、消毒防護用具(如口罩、手套、防護靴等)、消毒容器等。

對金屬設施裝置的消毒，可採取火焰、燻蒸和沖洗等方式消毒。

對圈舍、車輛、屠宰加工、貯藏等場所，可採用消毒液清洗、噴灑等方式消毒。

對養殖場(戶)的飼料、墊料，可採取堆積發酵或焚燒等方式處理，對糞便等汙物作化學處理後採用深埋、堆積發酵或焚燒等方式處理。

對疫區範圍內辦公、飼養人員的宿舍、公共食堂等場所，可採用噴灑方式消毒。

對消毒產生的汙水應進行無害化處理。

對於當前的非洲豬瘟疫情豬場主要措施就是預防；“藍輕鬆”，主要用於防治豬的病毒性傳染病（瘟疫病，如非洲豬瘟、藍耳、圓環、流感等）用於非洲豬瘟、藍耳、圓環、鏈球菌、流感、附紅體、弓形體及混感等引起的豬發熱性（瘟熱性）疾病的治療與預防。症見：高熱神昏、精神萎頓、結膜潮紅、充血；皮膚髮紅，體表出血、瘀血，四肢、下腹、會陰、臀部等部位尤其嚴重；咳嗽、喘氣、呼吸困難；嘔吐，食慾減退或廢絕，糞便乾硬、便秘或排膿性血便；母豬伴有不孕、流產、死胎。剖檢病死豬可見脾臟、肝臟、肺臟等臟器和淋巴結嚴重腫大，並廣泛性出血瘀血。本病急性發病時死亡率很高，尤其是母豬、大豬死亡更快。

預防拌料

預防量（2公斤藍輕鬆拌1噸料），每月使用7-14天；治療量（4-5公斤藍輕鬆拌1噸料），連用7天；

常規投藥，豬隻免疫力、抵抗力強，可有效抵禦野毒侵襲；抗應激能力強，消化功能好，生長速度快；疫苗免疫後抗體產生迅速而整齊；重大疫情時，不發病或發病少，病情輕，易於治療。

對於當前的豬場流行疫病，本產品已經有很好反饋。多家豬場與公司的試驗結果表明，用本產品進行預防性、保護性投藥，體現出顯著的“三減一降”效果，即：減緩發病、減輕病情、減少死亡；降低損失。“三減”給豬場留下了寶貴的時間，為實質性控制疾病與降低損失創造了條件。

非洲豬瘟如何預防，豬瘟的症狀有哪些

對衣、帽、鞋等可能被汙染的物品，可採取消毒液浸泡、高壓滅菌等方式消毒。

消毒頻率;疫點每天消毒3～5次，連續7天，之後每天消毒1次，持續消毒15天;疫區臨時消毒站做好出入車輛人員消毒工作，直至解除封鎖。

對於非瘟最有效的防控的檢測方法就是環境檢測，場外環境，場內環境，車輛，人員，物資，都需要使用PCR熒光定量檢測，豬群檢測豬的口腔，鼻腔，肛門檢測。因為血液檢測有滯後性，所以環境檢測可以做到早發現，早處理。

雖然非瘟病毒傳播速度比較慢，但是感染能力很穩定，形象點說就是老人走路，走的雖然慢但是很穩定。穩定的意思不僅是感染能力很穩定，在環境中的存活能力也很頑強，非洲豬瘟病毒在肉制食品中活性穩定，冰凍肉中，半熟肉、以及一些肉製品中，可存活數月至數年不等。尤其是在低溫環境中，例如凍肉中，非洲豬瘟病毒能存活1000天之久。而在被汙染的豬圈中也可以至少存活一個月，那豬場與外界接觸中，比如拉豬車，出豬臺，豬場外圍的道路，引入的物資，出入的人員都很有可能被汙染，而非洲豬瘟在外界環境的存活時間很長，雖然挺多豬場都會經過消毒等辦法防控非洲豬瘟，但是消毒前後，加強外圍防控半徑，離不開實驗室檢測，也就是PCR熒光定量檢測，做到早發現，早預防，早處理。

檢測的範圍涉及到場外和場內，以及車輛，人員，物資等，與外界接觸的位置或物品，需要常規進行檢測，經常與外界接觸的區域以及人員，物品，需要接觸前後都需要檢測，包括消毒。

場外道路，使用生理鹽水浸潤紗布每50米左右隨機採集一次路面，重點是汽車壓痕。至少每週兩次。人員進場門口和淋浴間，比如門把手，電燈開關，淋浴開關，洗髮水瓶外壁等。每次人員返場淋浴進入後，或有人員接觸進場門口。

場內的豬舍飲水槽、風機進風口、出豬臺、物資熏蒸室、豬舍進出口及門把手、無害化處理區域等重點目標進行採集頻，每月一次出豬臺每次售豬後都要檢測。

人員到達場對自己進行取樣，包括頭髮、衣服、鞋、手機，等待檢測結果陰性後再到場外隔離點進行更衣和淋浴，開始隔離。

物資用生理鹽水紗布對貨物外表面進行全面塗抹，每入一批，每批都需要檢測。飼料包裝用紗布採集，收集料口內的粉塵。蓄水池使用離心管收集5-10mL水樣，每週一次。

車輛使用浸潤紗布全覆蓋塗抹四個輪胎，車門把手、腳踏板、方向盤、掛擋杆、駕駛室腳墊、離合器等；卡車外表麵灰塵較多的地方塗抹取樣。每次進場車輛都要檢測。

瞭解非洲豬瘟的弱點，我們可以選擇消毒藥，使用一些辦法讓病毒滅活。

非洲豬瘟不耐高溫，並且對強酸、強鹼等物質是非常敏感的。非洲豬瘟病毒在56℃的生活，加熱70分鐘就能把它殺死。而溫度達到60℃，只要半個小時就能使其失去活性，總之是非洲豬瘟病毒的活性隨著溫度的升高而降低。常用的消毒藥火鹼，過硫酸氫鉀等。