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  • 1 # 使用者2213972807437

    RAPD技術是建立在PCR技術的基礎上,它用一系列(通常數百個)不同的隨機排列鹼基序列的寡核苷酸單鏈(一般為10個bp)作為引物,對所研究的基因組DNA進行單引物擴增。模板DNA經90—94變性 解鏈後在較低溫度(36~37℃)下退火,這時形成的單鏈模板會有許多位點與引物互補配對,在 72℃下,透過鏈延伸,形成雙鏈結構,完成DNA合成。重複上述過程,即可產生片段大小不等的擴增產物,透過電泳分離和顯色便可得到許多不同的條帶,從中 篩選出特徵性條帶。擴增產物片段的多型性反映了基因組DNA的多型性。如果基因組在這些區域內發生DNA片段插入、缺失或鹼基突變就可能導致這些特定結合 位點的分佈發生相應的變化,而使PCR產物增加、缺少或發生分子量的改變。因此,透過對PCR產物的檢測即可測出基因組DNA在這些區域的多型性。進行 RAPD分析時,可用引物的數量很大,雖然對每個引物而言,其檢測基因組DNA多型性的區域是有限的,但是利用一系列引物則可以使檢測區域幾乎覆蓋整個基 因組。因此,RAPD可以對整個基因組DNA進行多型性檢測。 RAPD技術的優點: ①不使用同位素,減少了對工作人員健康的危害; ②可以在物種沒有任何分子生物學研究 的情況下分析其DNA多型性; ③對模板 DNA的純度要求不高; ④技術簡單,無需克隆DNA探針,無需進行分子雜交; ⑤靈敏度高,可提供豐富的多型性; ⑥RAPD引物沒有嚴格的種屬界限,同一套 引物可以應用於任何一種生物的研究,因而具有廣泛性、通用性。 但是,RAPD技術較易受到各種因素的影響。無論是模板的質量和濃度,短的引物序列,PCR的迴圈次數,基因組DNA的複雜性,技術裝置等,都有可 能是RAPD技術重複性差的直接原因。目前,多從以下幾個方面來提高反應的穩定性: ①操作規範,反應體系的組成要力求一致,儘可能地使RAPD反應標準 化; ②提高擴增片段的解析度; ③將RAPD標記轉化為SCAR標記後再進行常規的PCR分析,可以提高反應的穩定性及可靠性。

  • 2 # 使用者889917172841

    RAPD:用一個(有時用兩個)隨機引物(一般8-10個鹼基)非定點地擴增基因組DNA,然後用凝膠電泳分開擴增片段。AFLP標記是選擇性擴增基因組DNA酶切片段所產生的擴增產物的多型性。

  • 中秋節和大豐收的關聯?
  • 如果我還是忘不掉一個人但是我們已經不能重蹈覆轍了並且每天都抬頭不見低頭見該怎麼辦?