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1 # 使用者7492497596096
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2 # 涼風丶月
作為一個跑過幾千塊膠的生物狗,我來回答一下。
SDS-PAGE用的最多的就是Tris-甘氨酸電泳液體系,穩定、可靠。對10-200kDa的蛋白質分離效果好。
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3 # KonKI1120
目前在大多數實驗室進行的SDS-PAGE為不連續電泳,即電泳膠分為上層的濃縮膠(也叫積層膠)和下層的分離膠。
配製凝膠的緩衝液一般是Tris-HCL緩衝系統,濃縮膠緩衝液pH為6.8,分離膠pH8。濃縮膠pH環境呈弱酸性,因而甘氨酸解離很少,其在電場的作用下,泳動速率慢;而Cl-離子泳動很快,兩者之間形成導電性較低的區帶。由於導電性與電場強度成反比,這一區帶的電壓梯度較高,壓著蛋白質分子不分大小聚集在一起,濃縮為一狹窄的條帶。當樣品進入分離膠後,膠內呈鹼性,甘氨酸大量解離,泳動速率加快,緊隨Cl-離子後,同時由於分離膠孔徑的縮小,在電場的作用下,蛋白分子根據其分子大小進行分離。小蛋白質分子在前,大蛋白在後。
電泳緩衝液則多為1xTris-甘氨酸緩衝液。
在整個電泳過程中,pH對整個體系影響很大,實驗中配製緩衝液時要保證pH測量準確。
我們公司一直用德晟科技的Tris緩衝劑來做聚丙烯醯胺凝膠電泳分離蛋白質,試驗效果一直都比較好。而且客服很有耐心