成人：肌內注射一日2～4g（2～4支），分4次給藥；靜脈滴注或注射劑量為一日4～8g（4～8支），分2～4次給藥。重症感染患者一日劑量可以增加至12g（12支），一日最高劑量為14g（14支）。兒童：肌內注射每日按體重50～100mg/kg，分4次給藥；靜脈滴注或注射每日按體重100～200mg/kg，分2～4次給藥。一日最高劑量為按體重300mg/kg。足月新生兒：按體重一次12.5～25mg/kg，出生第1、2日每12小時1次，第三日～2周每8小時1次，以後每6小時1次。早產兒：出生第一週、1～4周和4周以上按體重每次12.5～50mg/kg，分別為每12小時、8小時和6小時1次，靜脈滴注給藥。腎功能不全者：肌酐清除率為10～50ml/分鐘或小於10ml/分鐘時，給藥間期應分別延長至6～12小時和12～24小時。氨苄西林鈉溶液濃度愈高，穩定性愈差。在5℃時1%氨苄西林鈉溶液能保持其生物效價7天，但5%的溶液則為24小時。濃度為30mg/ml的氨苄西林鈉靜脈滴注液在室溫放置2～8小時仍能至少保持其90%的效價，放置冰箱內則可保持其90%的效價至72小時。穩定性可因葡萄糖、果糖和乳酸的存在而降低，亦隨溫度升高而降低。供肌內注射可分別溶解125mg、500mg和1g氨苄西林鈉地0.9～1.2ml、1.2～1.8ml和2.4～7.4ml滅菌注射用水中。氨苄西林鈉靜脈滴注液的濃度不宜超過30mg/ml。