巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能,易於傳代和瓶壁分離,但難以建株。培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法最為實用,其法如下:
1、實驗前三天,向每隻小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內)。
2、引頸殺死動物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。
3、置動物於解剖臺上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開面板拉向兩側,暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。
4、再用70%酒精擦洗腹膜壁後,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同時從兩側用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內充分流動。
5、用針頭輕輕挑起腹壁,使動物體微傾向一側,使腹腔中液體集於針頭下吸取入針管內。
6、小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g4℃離心10分鐘,去上清,加10mlEagle培養基。
7、計數細胞,每隻小鼠可產生20~30×105細胞,其中90%為巨噬細胞。
8、為獲取3×105帖附細胞/平方釐米,需接種2.5×106/ml。
9、為純化培養細胞,去除其它白細胞,接種數小時後,去除培養液,用Eagle液沖洗1~2次後,再加新Eagle培養液置37℃,5%CO2溫箱中培養。
巨噬細胞也建有無限細胞系,大多來自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等,均獲惡性,培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能,易於傳代和瓶壁分離,但難以建株。培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞,以小鼠腹腔取材法最為實用,其法如下:
1、實驗前三天,向每隻小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml(勿注入腸內)。
2、引頸殺死動物,手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3~5秒。
3、置動物於解剖臺上,用針頭固定四肢,雙手持鑷撕開面板拉向兩側,暴露出腹膜,但勿傷及腹膜壁。
4、再用70%酒精擦洗腹膜壁後,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同時從兩側用手指揉壓腹膜壁,令液體在腹腔內充分流動。
5、用針頭輕輕挑起腹壁,使動物體微傾向一側,使腹腔中液體集於針頭下吸取入針管內。
6、小心拔出針頭,把液體注入離心管中,250g4℃離心10分鐘,去上清,加10mlEagle培養基。
7、計數細胞,每隻小鼠可產生20~30×105細胞,其中90%為巨噬細胞。
8、為獲取3×105帖附細胞/平方釐米,需接種2.5×106/ml。
9、為純化培養細胞,去除其它白細胞,接種數小時後,去除培養液,用Eagle液沖洗1~2次後,再加新Eagle培養液置37℃,5%CO2溫箱中培養。