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  • 1 # CL陶

    細胞培養的條件

    1.所有與細胞接觸的裝置、器材和溶液等,都必須保持絕對無菌,避免細胞外微生物的汙染。

    目前最可靠和最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。

    如:玻璃製品、布類、金屬製品:6.8kg20min。

    橡膠製品:3.6~4.5kg10min。

    培養用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。

    實驗中染菌物品和動物屍體等:6.8 kg20min。

    試管、吸管等,則可採用乾熱滅菌;

    一切不適於加熱滅菌的液體,如人工合成培養液、小牛血清、胰蛋白酶等溶液,可採用過濾法除菌。

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    2.必須有足夠的營養供應,而絕對不可有有害的物質,包括極微量的有害離子的摻入,為此必須注意器材的清洗和配液用水的質量。

    細胞培養中對水的質量要求很高(見水處理)。

    3.保證有適量的氧氣供應。

    細胞代謝需要有空氣,否則細胞死亡。在用培養瓶進行靜止培養,或用轉瓶進行旋轉培養時,只要培養的液體量不超過總容量的30%,透過與液麵的空氣交換,可以保證細胞有足夠的氧氣。當用罐子深層培養時,則必須通氣,一般採用含5%CO2的空氣,或根據需要將CO2、N2、O2和空氣以不同比例混合,過量氧對細胞的生長也不利。

    4.需隨時清除細胞代謝中產生的有害產物。

    細胞在代謝過程中會產生大量代謝廢物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,這些產物對細胞的生存有害,必須及時清除。在小量培養時,當培養基中酚紅指示劑顯示黃色,表示已有相當量乳酸產生,要及時更換新鮮的培養基。在大量培養時,則需隨時測定葡萄糖和乳酸等含量,並調節灌流速度,使代謝產物保持在無害水平下。

    5.有良好的適於其生存的外界環境,包括溫度、pH、滲透壓和離子濃度等。

    不同的細胞對pH的要求不同,一般來說適於細胞生長的pH在6.8~7.4,過高或過低均不利於細胞生長。如上所述,細胞在代謝過程中會產生大量乳酸,使培養的pH下降。為了保持培養液的pH,常在培養液內加入各種緩衝系統,如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加緩衝劑Hepes液(常用濃度為10~50mol/L).

    6.及時分種,保持合適的細胞密度(見細胞傳代)

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