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1 # 扒劇少女喵
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2 # 源井生物科技
CRISPR/Cas9系統的原理是利用gRNA特異性識別靶序列,並引導Cas9核酸內切酶對靶序列的PAM上游進行切割,從而造成靶位點DNA雙鏈斷裂,隨之利用細胞的非同源末端連線(NHEJ)或同源重組(HDR)的方式對切割位點進行修復,實現DNA水平的敲除、敲入或點突變。CRISPR-U技術比普通CRISPR/Cas9技術的基因切割效率更高,同時可以大幅度提升同源重組效率,輕鬆實現細胞和動物水平的基因敲除(KO)、基因點突變(PM)和基因敲入(KI)。
CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)就是細菌體內的一串DNA序列,CRISPR系統還包括了一系列與之功能相關的蛋白。
CRISPR在細菌體內本來是起適應性免疫作用的(有點像人的獲得性免疫)。細菌也是會被得傳染病的嘛。細菌被病毒感染了,當然也不會束手就擒。病毒感染細菌,對於細菌而言就是細胞內多了一些不是自己的DNA序列,這些序列可能表達出一些對細菌本身有害的的蛋白,所以細菌只要把這些外來的DNA破壞掉就可以了。
CRISPR就是這麼一套很巧妙的系統。它先把外來DNA的片段整合進細菌自己的基因組,然後轉錄出RNA,經過一些剪下之後,利用這些RNA把帶有DNA內切酶活性的Cas蛋白直接引導到外源序列的位置,於是,外源DNA就可以被剪斷。對於細菌而言,就完成了對外來病原體的快速精確打擊。這些整合進基因組的序列還可以傳給子代細菌(要是人的免疫可以這麼遺傳,就不用每個小孩都拉去打疫苗了),所以CRISPR現在也被用作微生物分類的一個依據。
至於最近很火的CRISPR技術其實是利用了CRISPR系統中的RNA引導Cas蛋白去切斷目標DNA的這一個步驟。如果破壞的是自己的基因,不就是達到了基因敲除的作用了嘛。
當然CRISPR的爆紅主要是還是因為這套技術好用,一方面是省時間,一方面是精度高。省時間是因為要達成基因敲除的目的,只需把兩段序列匯入細胞就大功告成了。一段序列是Cas9蛋白的基因,它是可以切斷DNA雙鏈,就算是DNA有甲基化也照樣切。另一段用來轉錄一條RNA,前一部分是與目標基因配對的,後一半用來與蛋白結合,這樣就把Cas9拉過來,切斷目標基因。切斷了之後,對於真核細胞,各種修復手段就上了,結果通常是基因中間被插入或者刪除了幾個鹼基,這樣整個基因的編碼就全亂了,基因也就沒有原來的功能了,也就是完成了基因敲除。至於精度嘛,20個鹼基的長度定位一個基因一般是沒問題的,還有就只能感嘆Cas9這個蛋白的神奇了。
還有更神奇的,如果把Cas9蛋白的DNA內切酶活性滅掉,再給它加上別的催化活性,它就可以有別的功能。目前,抑制和促進基因表達都可以做到了。
啊?提問裡還有意義?
呆逼理科生最不會寫意義之類的東西。
個人覺得CRISPR首先是一個很好用的系統,在基礎研究上可以為研究人員節約不少時間,提高產出效率,也節約了科研經費。那都是納稅人的錢呀!
還有,CRISPR提供了一個應用面很廣的技術平臺,多種基因操作和調控都可以透過對CRISPR系統的最佳化來實現,應用前景一片大好。至少現在看來是很好。現在科研也是一個不小的市場,而CRISPR很有可能就是即將改變這個市場格局的技術。科研上用好了,自然會被用到工業和農業上。
至於臨床應用,肯定是用很長一段路要走的啦。