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1 # 使用者7657628814004
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2 # 飛燕3384
物理方法
1.體積選擇法
透過細胞體積大小分級,直接將處於相同週期的細胞進行分選,然後將同一狀態的細胞繼代培養於同一培養體系中,從而可能保持相同培養體系中的細胞具有較好的一致性。這種方法的優點是操作簡單,分選細胞維持了自然生長狀態,因而不會有其它處理所帶來的對細胞活力的影響。 低2.溫處理法
冷處理也可以提高培養體系中細胞同步化的程度。收集細胞,在4攝氏度溫度下處理數天,新增新鮮培養液。
化學方法
1 飢餓法
飢餓也是調整細胞同步化的方法之一。在一個培養體系中,如果細胞生長的基本成分喪失,而導致細胞因飢餓而分裂受阻,從而停留在某一分裂時期。當在培養基中加入所缺乏的成分或者將飢餓細胞轉入完整培養基中繼代培養時,細胞分裂又可以重新恢復。飢餓導致的細胞分裂受阻,常常使細胞不能合成DNA,即不能進入S期;或細胞分裂不能進行,即不能進入M期。
72 抑制法
透過一些DNA合成抑制劑處理細胞,使細胞滯留在DNA合成前期,當解除抑制後,即可獲得處於同一細胞週期-----G1期的同步化細胞。
操作步驟:
1. 準備:
開啟培養液,PBS;
取出離心管,擰開管蓋,管蓋倒放。從吸管筒中依次取出吸管,裝上吸頭,插入離心管備用。
2. 從培養箱內取出細胞,放在顯微鏡下觀察其生長狀態、密度。
3. 首先觀察培養板孔中培養液量。用吸管分別吸出兩個孔中的細胞連同培養液,轉入離心管中。再另取一隻吸管吸取PBS,放入培養板孔中,輕輕吹打孔壁,吸出轉入離心管。
4. 離心,設定離心機1000轉/分,4-5分鐘。
5. 取出離心管,輕輕吸出上清,倒入廢液缸。吸取培養液約7ML放入離心管,輕輕吹打細胞,使之均勻懸浮。
6. 吸取1ML細胞懸液1ML轉入EP管中,備計數用。
7. 其餘的細胞分別放入六個孔中,每孔約1ML。
8. 吸取培養液加入板孔中至1/3孔容量。
9. 鏡下觀察細胞是否分佈均勻,放入培養箱培養。