回覆列表
-
1 # 大大小問號
-
2 # 加油平常人
PCR是指核酸聚合酶鏈式反應,以DNA雙鏈為模板,在引物,DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按鹼基互補配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留複製鏈。重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留複製鏈”,以2的N次方方式擴增每完成一個迴圈需2~4分鐘,2~3小時在30次迴圈下就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
-
3 # 風雲我輩之漫步科研路
大家好,我不是權威,我是漫步科研路。
PCR幾乎是我們做科研的人天天都要做的事情,跟吃飯睡覺一樣頻繁。提出這個問題說明你還對PCR不太瞭解。PCR就是聚合鏈式反應,而我們進行PCR有很多種用途。根據用途的不一樣,迴圈次數也不一樣。當然有一點可以肯定的是迴圈數越多得到的PCR產物就越多,因為PCR產物的增加是以2的迴圈數次方增加的。
我來舉幾個例子,比如你如果要去擴增一個基因做基因克隆,這個時候你需要保證的PCR產物的量一定要大,不然後續的克隆成功率低,這樣的話對於表達量還好的基因大概就像你說的30幾個迴圈就夠了,但是有些基因表達量太低,這樣你的起始模板量太低,你就可能需要跑40個迴圈。而一些基因起始量很高,可能你只需要擴增20幾個迴圈就夠了。
我們也會做定量PCR,這個是最近新冠病毒的核酸檢測辦法,直接進行熒光PCR擴增就能搞定。而這裡的迴圈數也是根據情況去看。有可能需要40個迴圈,也有可能只需要20幾個迴圈就搞定了。
PCR要經歷30多次,有兩個方面的原因。
第一,PCR的作用是為了擴增目的片段的,在底物足夠的條件下,迴圈的次數越多,最後獲得的產物也就越多。雖然20個迴圈也可以了,但是多一點總是用的上的,減少浪費。
第二,這個也是主要原因,在PCR中用的taq酶,在PCR的程式中,保持高活性的時間也就在35個迴圈左右。再往後迴圈也是可以的,但是容易合成錯誤,形成錯配的產物,這種情況是我們不想要的。為了保證PCR產物的質量,一般我們設定都是30個迴圈。