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  • 1 # 深海中的一條小魚

    胞培養技術指的是細胞在體外條件下的生長,在培養的過程中細胞不再形成組織(動物)。

    培養物是單個細胞或細胞群。細胞在培養時都要生活在人工環境中,由於環境的改變,細胞的移動或受一些其他因素的影響,培養時間加長,傳代導致細胞出現單一化型。

    細胞體外培養生命期

    細胞在培養過程中持續增殖和生長的時間。一般根據細胞種類、性狀和原供體的年齡的情況而定。

    如:二倍體成纖維細胞,在不凍存和反覆傳代條件下可傳30~50代,相當於150~300個細胞增殖週期,能維持一年左右的生命,細胞便開始凋亡(apoptosis)。 細胞在生存過程中經歷以下三個階段

    1.原代培養期(primary culture)

    組織到第一次傳代時間大約為1~4周

    特點:

    細胞移動活躍,但分裂不旺盛,多呈二倍體核型。

    原代與體內原組織形態結構和功能活動基本相似。

    各細胞的遺傳性狀互不相關,細胞相互依存性強,如果把這種稀釋分散成單細胞,在軟瓊脂培養基中進行培養,細胞克隆的形成率(cloning efficiency)下降,表明細胞獨立生存性差。

    2.傳代期(passage)

    初代培養細胞一經傳代便稱之為細胞系(cell line)

    特點:

    細胞增殖旺盛,並維持二倍體核型,也叫二倍體細胞系(diploid cell line)為了儲存二倍體細胞性質,細胞應在初代或傳代早期凍存為好。

    一般細胞在10代以內凍存。

    凍存配方:

    向培養液加入保護劑二甲基亞碸(DMSO)或甘油,封入安瓶中。

    存於在液氮中溫度可達到-196℃,可長期儲存。如解凍後細胞復甦,仍能繼續增殖生長,細胞性狀不受影響,成為儲存細胞最主要的手段。

    3.衰退期

    特點:細胞仍生存 增殖減慢 不增殖 輪廓增強 衰退凋亡

    注意:細胞在三期中的任何一期(一般發生在傳代後期或衰退期)在某些因素影響下,如血清質量不佳、病毒汙染、溫度和pH不穩等,細胞可能發生自發轉化(spontaneous transformation);

    細胞可能獲得永生性(immortality) 或稱為惡性性(malignancy)。細胞獲得永續性的增殖能力,這樣的細胞群體稱為連續細胞系(continuous cell line)。而細胞獲得不死性後,細胞核型大多變成異倍體(heteroploid)接觸抑制消失。

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