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1 # 大菜007
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2 # 凝時空教育說
我是高中生物老師,剛好帶領學生做過這個實驗,下面我來解答這個問題。
大家對DNA三個字母並不陌生,DNA是生物體內的遺傳物質,主要存在於生物細胞核中,我們如何透過實驗來提取細胞核中的DNA呢?今天選用的生物材料是雞血,為什麼不用哺乳動物的紅細胞呢?哺乳動物紅細胞沒有細胞核,也就沒有DNA,鳥類動物不同於哺乳動物細胞,紅細胞是有細胞核的,而且也方便取材,那麼我們今天就用雞血做生物材料來提取細胞核中的DNA。
課前準備:
1、買雞血,帶有提前放入檸檬酸鈉溶液(抗凝)的燒杯,到早市買雞血300毫升。
2、把加了檸檬酸鈉的雞血放在冰箱中淨置24小時。
3、配置二苯胺溶液(注意現配現用)
4、配置0.2%的乙醛溶液
5、95%的酒精放入冰箱冷藏24小時,製得冷酒精。
6、配置2mol/L的氯化鈉溶液
實驗步驟:
1、破碎雞血細胞,釋放出DNA
取加了檸檬酸鈉的冷雞血,用滴管吸取下層的雞血10毫升放入250毫升的燒杯中。
然後燒杯中加入20毫升蒸餾水,用玻璃棒沿一個方向快速攪拌五分鐘,促進雞血細胞的破裂。蒸餾水可以使紅細胞破裂從而釋放出DNA。
應用單層紗布將上面的液體進行過濾,用1000毫升的燒杯收集濾液。
2、溶解DNA
在濾液中加入40毫升2mol/L的氯化鈉溶液,用玻璃棒沿一個方向攪拌一分鐘,使DNA充分溶解。
3、DNA的析出
沿燒杯內壁緩慢的繼續向燒杯中加入蒸餾水,降低氯化鈉溶液的濃度,DNA在氯化鈉濃度為0.14mol/L時溶解度最小,便於DNA的析出。用玻璃棒沿一個方向均勻不停的攪拌。
4、DNA的純化
用多層紗布進行過濾,用鑷子夾取留在紗布上的部分。
再取20毫升2mol/L的氯化鈉溶液倒入500毫升燒杯中,將鑷子上取的物質放入氯化鈉溶液中。
攪拌兩分鐘,使其儘可能多的溶解在氯化鈉溶液中,然後用兩層紗布繼續過濾,過濾雜質收集含有DNA的濾液。
量取50毫升冷酒精,緩慢加入濾液中,靜置三分鐘,溶液中出現白色絲狀物,用玻璃棒朝一個方向攪拌,把白色絲狀物捲到玻璃棒上,這些絲狀物就是DNA。
5、DNA的鑑定
取兩隻20毫升的大試管,各加入2mol/L的氯化鈉溶液5毫升。
將白色絲狀物放入其中一支試管,用玻璃棒攪拌,直到絲狀物溶解在氯化鈉溶液中。另一支試管做對照。
然後分別向兩支試管中加入4毫升二苯胺溶液。搖勻,沸水浴5分鐘。
冷卻,比較兩隻試管溶液顏色,溶解有DNA的溶液變藍色。
回覆列表
雞血DNA提取過程可以概括為幾步:
1 樣品加入抗凝劑,離心,去除上清液;2 血細胞中加入緩衝劑,細胞裂解,離 心,去細胞碎片,取上清液;3 加有機溶劑沉澱去除蛋白質等雜質;4 DNA分離、 純化、濃縮。整個過程需在低溫下進行。
DNA檢測可以上凝膠電泳,熒光染色;也可以用紫外分光光度檢測
具體的操作方法你可以查閱下相關資料,相關試劑可以買商品化DNA提取試劑盒。