骨骼肌細胞一般要分離的是骨骼肌衛星細胞（肌源性幹細胞），此細胞一般作為基因載體和組織工程方面的實驗。
1.實驗準備
新生SD乳鼠5只左右、DMEM完全培養基、DMEM培養基原液、胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ型、雙抗、75%酒精、6cm培養皿、無菌器械、預冷的PBS（最好含有雙抗）
2、原代細胞分離
1）新生乳鼠斷頭處死後，浸泡在75%酒精中消毒10min後取出置於超淨工作臺。
2） 臺內剪去面板，將四肢取下並去爪。在預冷的PBS緩衝液中剔除四肢周圍的脂肪、肌腱等組織，並涮洗3次。
3）將肌肉組織剪碎成1mm左右的碎塊，取5ml左右的DMEM培養基原液（含有終濃度為0.25%胰蛋白酶、0。1%膠原酶Ⅰ型），37度消化30min，每隔5min混勻一次。
4）觀察消化情況，一般消化至無明顯的大量組織塊即可。使用等體積的DMEM完全培養基終止消化。並用膠頭滴管吹打混勻，是剩餘組織塊吹散。
5）1000轉離心10min。棄上清。將沉澱用預冷的培養基重懸並過200目篩。離心收集沉澱。
6）用完全培養基重懸，並接種於培養瓶或6孔板中。1h後將上清液吸出重新接種到新的培養養瓶，再過1h再取出接種到經L-多聚賴氨酸鋪底的培養瓶中，以後每3天換液。
3、原代細胞的鑑定（IF法）
具體過程就是免疫熒光的過程，使用小鼠抗大鼠的α-sarcam etric actin 一抗，山羊抗小鼠的PE二抗，以及DAPI核染料。
骨骼肌細胞一般要分離的是骨骼肌衛星細胞（肌源性幹細胞），此細胞一般作為基因載體和組織工程方面的實驗。
1.實驗準備
新生SD乳鼠5只左右、DMEM完全培養基、DMEM培養基原液、胰蛋白酶、膠原酶Ⅰ型、雙抗、75%酒精、6cm培養皿、無菌器械、預冷的PBS（最好含有雙抗）
2、原代細胞分離
1）新生乳鼠斷頭處死後，浸泡在75%酒精中消毒10min後取出置於超淨工作臺。
2） 臺內剪去面板，將四肢取下並去爪。在預冷的PBS緩衝液中剔除四肢周圍的脂肪、肌腱等組織，並涮洗3次。
3）將肌肉組織剪碎成1mm左右的碎塊，取5ml左右的DMEM培養基原液（含有終濃度為0.25%胰蛋白酶、0。1%膠原酶Ⅰ型），37度消化30min，每隔5min混勻一次。
4）觀察消化情況，一般消化至無明顯的大量組織塊即可。使用等體積的DMEM完全培養基終止消化。並用膠頭滴管吹打混勻，是剩餘組織塊吹散。
5）1000轉離心10min。棄上清。將沉澱用預冷的培養基重懸並過200目篩。離心收集沉澱。
6）用完全培養基重懸，並接種於培養瓶或6孔板中。1h後將上清液吸出重新接種到新的培養養瓶，再過1h再取出接種到經L-多聚賴氨酸鋪底的培養瓶中，以後每3天換液。
3、原代細胞的鑑定（IF法）
具體過程就是免疫熒光的過程，使用小鼠抗大鼠的α-sarcam etric actin 一抗，山羊抗小鼠的PE二抗，以及DAPI核染料。