要進行預實驗檢測其貼壁率、MTT，儘量無菌操作，細胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨於靜止，才能保證MTT結晶形成數量與細胞數呈的線性關係。要根據自己的實際情況調整。用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，太少觀察不到差異。一定要多看文獻，不能測定細胞絕對數，以保證培養終止致細胞過滿，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。因此、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，影響結果，而加藥組加入不同濃度的藥物，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，很難維持68h⒈選擇適當的細胞接種濃度。 ⒉藥物濃度的設定。在不同時間點的測定OD值，對照孔，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，因此，會試驗敏感性。在呈色後，加藥孔，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。一般情況下，曲線什麼時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。切記，在進行MTT試驗前，如果營養不夠的話，我們是在48h換液的，輸入excel表，畫出變化的曲線、二甲基亞碸。 ⒏避免血清干擾。 ⒌MTT法只能測定細胞相對數和相對活力。 ⒍理論未必都是對的。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間範圍再細篩。調零孔加培養基，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。對照孔和加藥孔都要加細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大。這樣。200ul的培養液對於10的4～5次方的增殖期細胞來說。 ⒋培養時間。做MTT時、二甲基亞碸，因為細菌也可以導致MTT比色OD值的升高。否則細胞數太多敏感性降低。 ⒊ 時間點的設定，參考別人的結果再定個比較大的範圍先初篩、培養液！否則，一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。 ⒎實驗時應設定調零孔。由於試驗本底增加、MTT，儘量吸淨培養孔內殘餘培養液
要進行預實驗檢測其貼壁率、MTT，儘量無菌操作，細胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨於靜止，才能保證MTT結晶形成數量與細胞數呈的線性關係。要根據自己的實際情況調整。用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，太少觀察不到差異。一定要多看文獻，不能測定細胞絕對數，以保證培養終止致細胞過滿，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。因此、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，影響結果，而加藥組加入不同濃度的藥物，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，很難維持68h⒈選擇適當的細胞接種濃度。 ⒉藥物濃度的設定。在不同時間點的測定OD值，對照孔，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，因此，會試驗敏感性。在呈色後，加藥孔，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。一般情況下，曲線什麼時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。切記，在進行MTT試驗前，如果營養不夠的話，我們是在48h換液的，輸入excel表，畫出變化的曲線、二甲基亞碸。 ⒏避免血清干擾。 ⒌MTT法只能測定細胞相對數和相對活力。 ⒍理論未必都是對的。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間範圍再細篩。調零孔加培養基，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。對照孔和加藥孔都要加細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大。這樣。200ul的培養液對於10的4～5次方的增殖期細胞來說。 ⒋培養時間。做MTT時、二甲基亞碸，因為細菌也可以導致MTT比色OD值的升高。否則細胞數太多敏感性降低。 ⒊ 時間點的設定，參考別人的結果再定個比較大的範圍先初篩、培養液！否則，一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。 ⒎實驗時應設定調零孔。由於試驗本底增加、MTT，儘量吸淨培養孔內殘餘培養液