雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術較為常用,先將待測核酸結合到一定的固相支援物上,再與液相中的標記探針進行雜交。固相支援物常用硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡稱NC膜)或尼龍膜(nylon membrane)。固相雜交包括膜上印跡雜交和原位雜交。前者包括三個基本過程:第一,透過印跡技術將核酸片段轉移到固相支援物上;第二,用標記探針與支援物上的核酸片段進行雜交;第三,雜交訊號的檢測。用探針對細胞或組織切片中的核酸雜交併進行檢測的方法稱之為核酸原位雜交。某特點是靶分子固定在細胞中,細胞固定在載玻片上,以固定的細胞代替純化的核酸,然後將載玻片浸入溶有探針的溶液裡,探針進入組織細胞與靶分子雜交,而靶分子仍固定在細胞內。例如。可用特異性的細菌、病毒的核酸做為探針對組織、細胞進行原位雜交,以確定有無該病原體的感染等。原位雜交不需從組織中提取核酸,對於組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,在臨床應用上有獨特的意義。近年來液相雜交技術有所發展。液相雜交與固相雜交的主要區別是不用純化或固定的靶分子,探針與靶序列直接在溶液裡作用。液相雜交步驟有所簡化,雜交速度有所提高,增加了特異性和敏感性,但與臨床診斷所要求的特異性和敏感性還有一定的距離。各種雜交技術中,膜上印跡雜交技術應用最為廣泛,它由以下三個基本過程組成。
雜交技術有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術較為常用,先將待測核酸結合到一定的固相支援物上,再與液相中的標記探針進行雜交。固相支援物常用硝酸纖維素膜(nitrocellulose filter membrane,簡稱NC膜)或尼龍膜(nylon membrane)。固相雜交包括膜上印跡雜交和原位雜交。前者包括三個基本過程:第一,透過印跡技術將核酸片段轉移到固相支援物上;第二,用標記探針與支援物上的核酸片段進行雜交;第三,雜交訊號的檢測。用探針對細胞或組織切片中的核酸雜交併進行檢測的方法稱之為核酸原位雜交。某特點是靶分子固定在細胞中,細胞固定在載玻片上,以固定的細胞代替純化的核酸,然後將載玻片浸入溶有探針的溶液裡,探針進入組織細胞與靶分子雜交,而靶分子仍固定在細胞內。例如。可用特異性的細菌、病毒的核酸做為探針對組織、細胞進行原位雜交,以確定有無該病原體的感染等。原位雜交不需從組織中提取核酸,對於組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,在臨床應用上有獨特的意義。近年來液相雜交技術有所發展。液相雜交與固相雜交的主要區別是不用純化或固定的靶分子,探針與靶序列直接在溶液裡作用。液相雜交步驟有所簡化,雜交速度有所提高,增加了特異性和敏感性,但與臨床診斷所要求的特異性和敏感性還有一定的距離。各種雜交技術中,膜上印跡雜交技術應用最為廣泛,它由以下三個基本過程組成。