瓊脂擴散試驗具體操作和結果判定程式如下：（1）材料準備①硫柳汞溶液、pH7.2的0.01摩爾/升PBS液。②製作瓊脂板。③禽流感瓊脂凝膠免疫擴散抗原、標準陰性和陽性血清。（2）操作方法①打孔。在製備的瓊脂板上按7孔一組的梅花形打孔（中間1孔，周圍6孔），孔徑約5毫米，孔距2～5毫米，將孔中的瓊脂用8號針頭斜面向上從右側邊緣插入，輕輕向左側方向將瓊脂挑出，勿傷邊緣或使瓊脂層脫離皿底。②封底。用酒精燈輕烤平皿底部至瓊脂剛剛要熔化為止，封閉孔的底部，以防側漏。③加樣。用微量移液器或帶有6～7號針頭的0.25毫升注射器，吸取抗原懸液滴入中間孔（下頁圖中的⑦號），標準陽性血清分別加入外周的①和④孔中，被檢血清按編號順序分別加入另外4個外周孔（下頁圖中的②、③、⑤、⑥號孔）。每孔均以加滿不溢位為度，每加一個樣品應換一個滴頭。④作用。加樣完畢後，靜置5～10分鐘，然後將平皿輕輕倒置放入溼盒內，37℃溫箱中作用，分別在24小時、48小時和72小時觀察並記錄結果。（3）結果判定①判定方法。將瓊脂板置日光燈或側強光下觀察，若標準陽性血清（圖中的①和④號孔）與抗原孔之間出現一條清晰的白色沉澱線，則試驗成立。②判定標準a.若被檢血清孔（如圖中的②號）與中心抗原孔之間出現清晰緻密的沉澱線，且該線與抗原和標準陽性血清之間沉澱線的末端相吻合，則被檢血清判為陽性。b.被檢血清孔（如圖中的③號）與中心孔之間雖不出現沉澱線，但標準陽性血清孔（如圖中的④號）的沉澱線一端向被檢血清孔內側彎曲，則此孔的被檢樣品判為弱陽性（凡弱陽性者應重複試驗，仍為弱陽性者，判為陽性）。c.若被檢血清孔（如圖中的⑤號）與中心孔之間不出現沉澱線，且標準陽性血清沉澱線直向被檢血清孔，則被檢血清判為陰性。d.被檢血清孔（如圖中的⑥號）與中心抗原孔之間沉澱線粗而混濁或標準陽性血清與抗原孔之間的沉澱線交叉並直伸，被檢血清孔為非特異反應，應重做，若仍出現非特異反應則判為陰性。