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  • 1 # 使用者1632789558318

    將質粒轉染進大腸桿菌中,質粒和大腸桿菌需要從實驗室悄悄地帶出來。記得順便帶不同標度的移液槍和滅過菌的槍頭,滅過菌的離心管,滅過菌的AMP-LB液體培養基以及MilliQ。(在家裡做還是需要注意不要汙染的嘛。)將空調調整至37度,將轉染過的大腸桿菌放進AMP-LB液體培養基,然後將搖12h。(家中有貓貓狗狗的建議綁在它們的背上,讓它們幫你搖,實在不行倉鼠也可以試試。)12h過後,需要用到一個繩子栓在瓶子上,把長滿大腸菌的培養基放進瓶子,然後就是表演時間了,這一步你需要瘋狂轉圈,達到4500rpm的速度,透過離心力將大腸菌沉澱到培養基的底部,然後倒掉上清。這一步需要一些溶液,建議還是回實驗室偷,Sol 1,2,3,這些試劑自己配家裡沒有原料的,還需要滅菌,乾脆再去實驗室偷一點。然後就是按順序加進去,混勻。若是順利出現白色絮狀物和澄清溶液則放進冰箱冷凍層,等待3-5min。然後,拿出之前那個帶著繩子的瓶子,這次的難度將會是地獄難度,你需要達到14000rpm的速度,旋轉10min。然後取出上清。再去實驗偷溶液。這次要偷的是3M NaOAC和乙醇。加入這些溶液,混勻,放進冰箱冷凍層,等待1-2h。這個時候你需要緩一緩,休息一下,因為接下來你還要轉圈。休息好之後,拿出帶繩子的瓶子,達到14000rpm的速度,旋轉10min。除去上清,留下沉澱。這個時候你已經粗提純質粒了。用冰的75%乙醇洗沉澱,至於這個冰的75%乙醇自己在家配也可以,去實驗室偷可以。然後拿出帶繩子的瓶子,達到14000rpm的速度,旋轉5min。除去上清,留下沉澱。這個時候如果你已經順利的提取質粒了,不過裡面還有大量的RNA,如果你還有一口氣,還需要用氯化鎂溶液沉澱RNA。當然,如果這個時候你還活著的話……你就順利的在家提取了質粒。

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