一般來說,細胞的計數方法是:細胞數/mL=4個大格細胞總數/4×10000×稀釋倍
數
操作步驟:
1.取10ul細胞懸液與10ul臺盼蘭混合均勻於1.5ml離心管中。
2.蓋上蓋玻片,取10ul混合液自血球計數盤上方加入,於10倍生物顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞被染成藍色。
3.分別計數四個大方格,得到細胞總數,再除以4,乘以稀釋倍數(本實驗為2),最後乘以104,即為每ml細胞懸液中細胞數。若細胞位於線上,只計上線與左線(計上不計下,計左不計右)。
注:
1.細胞數/ml=4大格細胞總數×稀釋倍數×104/4;每一大格的體積為=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
2.計數板計數時,最適細胞濃度為5~10×105個/ml,此範圍外計數誤差偏大。
3.高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。
例
活細胞數/方格:55,62,49,59;死細胞數/方格:5,3,4,6;細胞總數=243
平均細胞數/方格=60.75;稀釋倍數=2;
細胞數/ml:60.75×104×2=1.22×106;
細胞數/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106
存活率:225/243﹦92.6%
一般來說,細胞的計數方法是:細胞數/mL=4個大格細胞總數/4×10000×稀釋倍
數
操作步驟:
1.取10ul細胞懸液與10ul臺盼蘭混合均勻於1.5ml離心管中。
2.蓋上蓋玻片,取10ul混合液自血球計數盤上方加入,於10倍生物顯微鏡下觀察,活細胞不染色,死細胞被染成藍色。
3.分別計數四個大方格,得到細胞總數,再除以4,乘以稀釋倍數(本實驗為2),最後乘以104,即為每ml細胞懸液中細胞數。若細胞位於線上,只計上線與左線(計上不計下,計左不計右)。
注:
1.細胞數/ml=4大格細胞總數×稀釋倍數×104/4;每一大格的體積為=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml
2.計數板計數時,最適細胞濃度為5~10×105個/ml,此範圍外計數誤差偏大。
3.高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續稀釋後計數。
例
活細胞數/方格:55,62,49,59;死細胞數/方格:5,3,4,6;細胞總數=243
平均細胞數/方格=60.75;稀釋倍數=2;
細胞數/ml:60.75×104×2=1.22×106;
細胞數/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106
存活率:225/243﹦92.6%