首先理清基因文庫的概念 他可不是基因庫。“基因文庫一個生物體的基因組DNA用限制性內切酶部分酶切後，將酶切片段插入到載體DNA分子中，所有這些插入了基因組DNA片段的載體分子的集合體，將包含這個生物體的整個基因組，也就是構成了這個生物體的基因文庫。”基因文庫方法不是建立基因文庫就獲取了目的基因，而是透過建立了基因文庫再利用探針在基因文庫的大海中搜尋一定包含的目的基因。在基因文庫中，不同的 DNA片段都分別在不同的克隆中擴增了，只要有該基因的探針存在，則從許多克隆中篩選一個所需的克隆是一項比較簡單的工作。此外基因文庫中被克隆的 DNA都是基因組中各種隨機的順序片段，某些 DNA片段還包括基因外部的鄰近的甚至互相跨疊的序列，所以基因文庫特別有利於研究天然狀態下基因的順序組織。所以它是獲取真核目的基因的一種有效手段，常用於生產實踐。不知道這樣解釋樓主能明白麼。我以後打算當生物老師呢，呵呵。補充：基因文庫主要目的是分離目的基因，只不過直接從真核細胞中分離很麻煩，但是基因文庫方便分離（見上），所以他是需要已知序列的探針，哪怕只是目的基因序列的一部分的探針也可以，只要能識別目的基因就行。書上的意思應該是目的基因的核苷酸序列未知（包括內含子、TATA框相應基因序列等等完整序列未知），但是探針、mrna是已知的（它們不完整，只能用來識別目的基因，不能替代目的基因，也不能直接用來合成，否則外顯子、調控序列與目的基因會有不小的差異） 因為真正的未知序列想要製備分離就很麻煩了：一般情況是將你要做的東西，丟到ncbi裡面進行搜尋，然後收集序列，最好選擇與你做的基因的來源親緣關係近的物種，選擇出來後在ncbi中進行blast進行比對，然後找到保守序列，設計簡併引物，可以從基因組中擴增也可以從rna進行擴增，如果擴增的得到的不是全基因序列，可以用walking等方法擴增得到全基因序列。得到序列後你就可以進行轉化表達，分析功能瞭如果你的東西DNA水平的同源性比較低的話，就要多找很多序列進行分析，然後找到比較保守的block區域。可以用codehop線上網站進行block的尋找和簡併引物的設計
首先理清基因文庫的概念 他可不是基因庫。“基因文庫一個生物體的基因組DNA用限制性內切酶部分酶切後，將酶切片段插入到載體DNA分子中，所有這些插入了基因組DNA片段的載體分子的集合體，將包含這個生物體的整個基因組，也就是構成了這個生物體的基因文庫。”基因文庫方法不是建立基因文庫就獲取了目的基因，而是透過建立了基因文庫再利用探針在基因文庫的大海中搜尋一定包含的目的基因。在基因文庫中，不同的 DNA片段都分別在不同的克隆中擴增了，只要有該基因的探針存在，則從許多克隆中篩選一個所需的克隆是一項比較簡單的工作。此外基因文庫中被克隆的 DNA都是基因組中各種隨機的順序片段，某些 DNA片段還包括基因外部的鄰近的甚至互相跨疊的序列，所以基因文庫特別有利於研究天然狀態下基因的順序組織。所以它是獲取真核目的基因的一種有效手段，常用於生產實踐。不知道這樣解釋樓主能明白麼。我以後打算當生物老師呢，呵呵。補充：基因文庫主要目的是分離目的基因，只不過直接從真核細胞中分離很麻煩，但是基因文庫方便分離（見上），所以他是需要已知序列的探針，哪怕只是目的基因序列的一部分的探針也可以，只要能識別目的基因就行。書上的意思應該是目的基因的核苷酸序列未知（包括內含子、TATA框相應基因序列等等完整序列未知），但是探針、mrna是已知的（它們不完整，只能用來識別目的基因，不能替代目的基因，也不能直接用來合成，否則外顯子、調控序列與目的基因會有不小的差異） 因為真正的未知序列想要製備分離就很麻煩了：一般情況是將你要做的東西，丟到ncbi裡面進行搜尋，然後收集序列，最好選擇與你做的基因的來源親緣關係近的物種，選擇出來後在ncbi中進行blast進行比對，然後找到保守序列，設計簡併引物，可以從基因組中擴增也可以從rna進行擴增，如果擴增的得到的不是全基因序列，可以用walking等方法擴增得到全基因序列。得到序列後你就可以進行轉化表達，分析功能瞭如果你的東西DNA水平的同源性比較低的話，就要多找很多序列進行分析，然後找到比較保守的block區域。可以用codehop線上網站進行block的尋找和簡併引物的設計