檢測方法
多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散,彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內,使兩者進行相互擴散,當抗原抗體濃度之比相適宜時,彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點:簡便,但敏感性較低,易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗淨後用75%乙醇沖洗,晾乾後放在水平臺上備用。
*將1%agar 融化後,置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠,約1.5mm 厚,凝固後打孔(直徑 3rnm),孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品,周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置溼盒內,室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A(抗-B)效價的方法 待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合,放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體,吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋,稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024,然後每管加入相應的3%~5%紅細胞懸液,置37℃水浴30 min,觀察是否凝集,不凝集者用生理鹽水洗滌3次,然後加入低離子鹽水介質(LIM液),混勻,滴入2滴凝聚胺,混勻後3 000 r/min離心30 s,扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做),再加入2滴重懸液,輕搖,觀察凝集是否消失,凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗,需較多的抗血清,現已很少用;
*對流免疫電泳,比瓊脂免疫雙擴散法敏感,較簡便、實用;
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1:128是沒有問題的,有些孕婦高達1:256以上,而且抗體效價最好1個月查上一次,有時候會有所變化。
檢測方法
多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散,彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內,使兩者進行相互擴散,當抗原抗體濃度之比相適宜時,彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點:簡便,但敏感性較低,易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗淨後用75%乙醇沖洗,晾乾後放在水平臺上備用。
*將1%agar 融化後,置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠,約1.5mm 厚,凝固後打孔(直徑 3rnm),孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品,周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置溼盒內,室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A(抗-B)效價的方法 待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合,放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體,吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋,稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024,然後每管加入相應的3%~5%紅細胞懸液,置37℃水浴30 min,觀察是否凝集,不凝集者用生理鹽水洗滌3次,然後加入低離子鹽水介質(LIM液),混勻,滴入2滴凝聚胺,混勻後3 000 r/min離心30 s,扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做),再加入2滴重懸液,輕搖,觀察凝集是否消失,凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗,需較多的抗血清,現已很少用;
*對流免疫電泳,比瓊脂免疫雙擴散法敏感,較簡便、實用;
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1:128是沒有問題的,有些孕婦高達1:256以上,而且抗體效價最好1個月查上一次,有時候會有所變化。