細胞系預實驗-MOI 的確定
預實驗的目的是瞭解所操作細胞被慢病毒載體感染的容易程度，另一方面在一些情況下雖然慢病毒已經感染進入細胞，但由於表達標記基因的啟動子在該細胞內的表達效率不高，沒能觀察到感染現象。我們在預實驗方案中加入不同啟動子的病毒進行感染，並且用定量PCR測定感染後細胞內整合病毒，這樣即使病毒沒有表達也可以觀察感染。
感染前一天接種，使得第二天細胞匯合度為30-40%。培養板可以是96孔板（只通過顯微鏡觀察熒光）或是24孔板（透過流式或是定量PCR確定感染比例）。
2. 設定不同MOI值的感染組，通常設立1，2，5，10，20，50，100的感染組別，各做兩個孔，一個孔中加入終濃度為5 μg/ml的polybrene，另一組不加。Polybrene可以促進病毒對細胞的侵染，但在少數情況下它對細胞有傷害。常用的對照病毒包括CMV-GFP，EF1a-GFP，UbiC-GFP，PGK-GFP。一般細胞裡面CMV啟動子的表達活性是最強的，但在血液來源的一些癌細胞中EF1a的表現要優於CMV。UbiC在一般細胞中都表達，但表達活性一般要低一些，它在神經元等原代細胞的感染中是最好的。
3. 12-24小時後，將培養上清丟掉同時除去沒有感染細胞的病毒，更換為新鮮的培養基。
4. 感染3-4天后可以在熒光顯微鏡下觀察，細胞應當會被感染並表達熒光。細胞感染的比例可以透過拍照目測估計或是根據圖片數數計算。
5. 如果是用24孔板做的預實驗，則可以用消化液將細胞消化成單個，透過流式細胞法得到每個感染複數下被感染細胞比例，此時注意設定空細胞組用於對照。
6. 也可以將消化下來的細胞抽提基因組DNA，用滴度測定中介紹的定量PCR方法得到整合病毒和細胞的比例。注意如果是所感染為動物細胞則需要用相應物種的內參基因。
當後期實驗用的細胞培養面積與預實驗不同時，則需要放大感染系統。實驗體系放大的原則是保持細胞的密度一致，按照底面積增加病毒用量，同時保持培養基和底面積的比例就可以達到與預實驗一致的感染效果。當細胞密度與預實驗有出入時，如果細胞密度變大，則相應增加病毒用量，如果細胞密度變小，則保持病毒用量不變。
細胞系預實驗-MOI 的確定
預實驗的目的是瞭解所操作細胞被慢病毒載體感染的容易程度，另一方面在一些情況下雖然慢病毒已經感染進入細胞，但由於表達標記基因的啟動子在該細胞內的表達效率不高，沒能觀察到感染現象。我們在預實驗方案中加入不同啟動子的病毒進行感染，並且用定量PCR測定感染後細胞內整合病毒，這樣即使病毒沒有表達也可以觀察感染。
感染前一天接種，使得第二天細胞匯合度為30-40%。培養板可以是96孔板（只通過顯微鏡觀察熒光）或是24孔板（透過流式或是定量PCR確定感染比例）。
2. 設定不同MOI值的感染組，通常設立1，2，5，10，20，50，100的感染組別，各做兩個孔，一個孔中加入終濃度為5 μg/ml的polybrene，另一組不加。Polybrene可以促進病毒對細胞的侵染，但在少數情況下它對細胞有傷害。常用的對照病毒包括CMV-GFP，EF1a-GFP，UbiC-GFP，PGK-GFP。一般細胞裡面CMV啟動子的表達活性是最強的，但在血液來源的一些癌細胞中EF1a的表現要優於CMV。UbiC在一般細胞中都表達，但表達活性一般要低一些，它在神經元等原代細胞的感染中是最好的。
3. 12-24小時後，將培養上清丟掉同時除去沒有感染細胞的病毒，更換為新鮮的培養基。
4. 感染3-4天后可以在熒光顯微鏡下觀察，細胞應當會被感染並表達熒光。細胞感染的比例可以透過拍照目測估計或是根據圖片數數計算。
5. 如果是用24孔板做的預實驗，則可以用消化液將細胞消化成單個，透過流式細胞法得到每個感染複數下被感染細胞比例，此時注意設定空細胞組用於對照。
6. 也可以將消化下來的細胞抽提基因組DNA，用滴度測定中介紹的定量PCR方法得到整合病毒和細胞的比例。注意如果是所感染為動物細胞則需要用相應物種的內參基因。
當後期實驗用的細胞培養面積與預實驗不同時，則需要放大感染系統。實驗體系放大的原則是保持細胞的密度一致，按照底面積增加病毒用量，同時保持培養基和底面積的比例就可以達到與預實驗一致的感染效果。當細胞密度與預實驗有出入時，如果細胞密度變大，則相應增加病毒用量，如果細胞密度變小，則保持病毒用量不變。