影響熒光分光光度法定量測定的主要因素

1．激發光照射

有一些熒光物質若受到強光照射，會發生分解而導致F↓。所以，熒光分光光度計通常在激發光單色器後裝配有光閘，在測定時才打開光閘讓激發光照射樣品池。

2．溫度

溫度↑，熒光效率下降，F↓。因為，溫度↑，增加分子間碰撞機會而使能量消耗掉。

3．pH值

pH值能改變某些熒光物質的電子構型從而影響熒光強度。

4．溶劑

有些溶劑會使熒光效率下降，也可能帶來干擾熒光。

熒光分光光度法基本原理

由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中，激發樣品中的熒光物質發出熒光，熒光經過濾過和反射後，被光電倍增管所接受，然後以圖或數字的形式顯示出來。

物質熒光的產生是由在通常狀況下處於基態的物質分子吸收激發光後變為激發態, 這些處於激發態的分子是不穩定的,在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產生熒光．

不同物質由於分子結構的不同,其激發態能級的分佈具有各自不同的特徵，這種特徵反映在熒光上表現為各種物質都有其特徵熒光激發和發射光譜；因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑑定。

在溶液中，當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關係,即IF=KC,利用這種關係可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也採用標準曲線法進行。