檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變的研究目的建立聚合酶鏈反應-單鏈構象多型性(PcR-SSCP)檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變的方法,並評價其臨床應用的價值。方法依據結核分枝桿菌rpoB基因的耐利福平決定區設計引物,用PCR從臨床分離株和直接從痰標本中擴增rpoB基因片段;對擴得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,並隨機測定rpoB片段的序列。結果PCR從所有212株結核分枝桿菌中均擴得230bP片段,135份抗酸染色陽性的痰標本中,有113份擴得陽性片段(83.7%)。在SSCP分析中,140份經L-J藥敏試驗檢測為利福平耐受的結核分枝桿菌,有130份有rpoB基因突變(符合率為92.9%),72份經LJ藥敏試驗檢測為利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因無突變(符合率為93.1%)。測序分析發現57份經SSCP檢測為突變的rpoB片段均有序列改變,10份經SSCP分析為無突變的有8份無序列改變,SSCP與測序結果的符合率為94.0%。在本研究的菌株中,耐多藥結核病(MDR-TB)佔76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多藥菌株經SSCP檢測有rpoB突變。結論建立的PCR-SSCP分析方法,是一種較準確和穩定的檢測結核分枝桿菌IpoB基因突變的方法,可用於臨床快速分析患者結核分枝桿菌對利福平的耐藥性,並可作為MDR-TB判斷的一個重要指標。
檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變的研究目的建立聚合酶鏈反應-單鏈構象多型性(PcR-SSCP)檢測結核分枝桿菌rpoB基因突變的方法,並評價其臨床應用的價值。方法依據結核分枝桿菌rpoB基因的耐利福平決定區設計引物,用PCR從臨床分離株和直接從痰標本中擴增rpoB基因片段;對擴得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析,並隨機測定rpoB片段的序列。結果PCR從所有212株結核分枝桿菌中均擴得230bP片段,135份抗酸染色陽性的痰標本中,有113份擴得陽性片段(83.7%)。在SSCP分析中,140份經L-J藥敏試驗檢測為利福平耐受的結核分枝桿菌,有130份有rpoB基因突變(符合率為92.9%),72份經LJ藥敏試驗檢測為利福平敏感的菌,有67份的rpoB基因無突變(符合率為93.1%)。測序分析發現57份經SSCP檢測為突變的rpoB片段均有序列改變,10份經SSCP分析為無突變的有8份無序列改變,SSCP與測序結果的符合率為94.0%。在本研究的菌株中,耐多藥結核病(MDR-TB)佔76.4%(107/140),有92.5%(99/107)耐多藥菌株經SSCP檢測有rpoB突變。結論建立的PCR-SSCP分析方法,是一種較準確和穩定的檢測結核分枝桿菌IpoB基因突變的方法,可用於臨床快速分析患者結核分枝桿菌對利福平的耐藥性,並可作為MDR-TB判斷的一個重要指標。