溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後，可使該菌因細胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關係。
【材料】
1? 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標準品，受驗者唾液。
2? 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3? 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。
4? 分光光度計，水浴箱，溫箱等。
【方法】
菌液配製：將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鐘後製成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標準液配製：稱取溶菌酶標準品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本：待檢測者用清水漱口後，將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標準品和唾液樣品，每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表，繪製標準曲線，並從標準曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。 本實驗在平板上進行唾液…
溶菌酶( lysozyme )主要是由吞噬細胞合成並分泌的一種小分子粘性蛋白，屬乙醯多糖酶。存在於唾液、、淚液和鼻及氣管等分泌物中，能溶解革蘭氏陽性細菌。由於它的高等電點( pH11.0 )，使它能與細菌牢固結合，並水解細菌細胞壁肽聚糖，使細菌裂解死亡。
本實驗在平板上進行唾液酶的測定。溶菌酶與枯草芽胞桿菌( Bacillus subtilis )作用後，可使該菌因細胞壁破壞而溶解，致使瓊脂板加樣孔周圍出現溶菌環。溶菌環直徑與樣品中溶菌酶含量的對數呈直線關係。
【材料】
1? 無菌 PBS ( pH6.4 ， 1/15mol/L )， 5mol/LKOH ， 3%PBS 瓊脂，溶菌酶標準品，受驗者唾液。
2? 枯草芽胞桿菌 12 小時培養物。
3? 10×100 試管，試管架，無菌平皿，打孔器，微量加樣器。
4? 分光光度計，水浴箱，溫箱等。
【方法】
菌液配製：將 PBS 加入枯草芽胞桿菌斜面，置室溫 5-10 分鐘後製成菌懸液；在波長 640nm 處，測定菌懸液的濃度，並將菌液濃度調至透光率 30-40% 。
2. 溶菌酶標準液配製：稱取溶菌酶標準品，用 PBS 配成 1000 m g/ml ，置冰箱凍存，臨用時再稀釋成 100 、 50 、 25 和 10 m g/ml 。
3. 收集唾液標本：待檢測者用清水漱口後，將唾液收集於消毒平皿內待用。
4. 加熱融化 3% 瓊脂，冷至 60 -70℃ ，與預熱好的枯草芽胞桿菌菌懸液等體積混合，到平板。用打孔器在平板上打孔，孔間距約 1.5cm , 每平板可打孔 8-9 個。
5. 各孔內依次加溶菌酶標準品和唾液樣品，每孔 20 m l 。
6. 置於 24 -26 ℃ 12-18 小時後測量溶菌環直徑。
【結果判斷】
記錄溶菌環的直徑( mm )於下表，繪製標準曲線，並從標準曲線上查出所測樣品的溶菌酶含量。