以撒的結合胎衣新人物解鎖方法如下：lost：攜帶飾品Missing Poster然後死在獻祭房中間的刺上即可解鎖。莉莉絲（LiLith）：使用阿薩謝爾通關貪婪模式，擊敗最終boss大貪婪就可以解鎖。店長（Keeper）：貪婪捐款機捐入1000塊錢解鎖。胎衣＋中新增人物亞巴頓：azazel通關寶箱層解鎖。

以撒：遊戲出來就有

抹大拉：獲得七個或大於七個心之容器

該隱：獲得五十五個或以上錢解鎖

夏娃：連續兩層不拾取任何心解鎖【透過道具得的不算】

參孫：連續兩層不傷任何心解鎖

猶大：擊敗撒旦兩次解鎖

小藍人：擊敗十次媽媽的心臟解鎖

拉撒路：擁有四顆或更多魂心【藍心】解鎖

小惡魔：在一局遊戲裡與惡魔交易三次解鎖

lost：共分四步。第一步：用以撒被炸彈怪【頭上頂有炸彈的怪】炸死;第二步：用抹大拉在第三層用炸彈把自己炸死;第三步：用猶大被媽腿踩死;第四步：用小惡魔死於撒旦的第二形態【就是雕像變成人的那個，而且要在地獄層才起效】

LiLith：使用阿薩謝爾通關貪婪模式，擊敗最終boss大貪婪就可以解鎖

Keeper：貪婪模式打通後的存錢罐存一千就解鎖了，要最新版本的才行