比色法
用比色法測定時,應取對照品同時操作。除另有規定外,比色法所用的空白係指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液, 然後依次加入等量的相應試劑,並用同樣方法處理。在規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸收度後,按紫外分光光度法項下(1)對照品比較法的計算式計算供試品濃度。
當吸收度和濃度關係不呈線性時,應取數份梯度量的對照品溶液,用溶劑補充至同一體積,顯色後測定各份溶液的吸收度,然後以吸收度與相應的濃度繪製標準曲線,再根據供試品的吸收度在標準曲線上求出其含量。
比色法用比色法測定時,應取對照品同時操作。除另有規定外,比色法所用的空白係指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液, 然後依次加入等量的相應試劑,並用同樣方法處理。在規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸收度後,按紫外分光光度法項下(1)對照品比較法的計算式計算供試品濃度。...
透射比濁法(Turbidimetry):根據Lambert-Beer定律,當一束光線透過帶有微小粒子的懸浮液和膠體溶液時,此溶液受到光散射和光吸收兩個因素影響可使光的強度減弱,減弱的程度與溶液中微小粒子的含量成正比。所以,當光線透過免疫複合物時,由於反應體系中複合物顆粒對光線的反射和吸收,引起透射光減少,測量透過反應體系後的透射光照到光電倍增管的光強度,或者測定反應體系的吸光度,推匯出溶液中待測物質的濃度。
散射比濁法(Nephelometry):根據Rayleigh定律,粒子被光照射後而發光,發光的輕度與粒子的大小以及照射光的角度有關。當光線透過免疫複合物時,由於反應體系中複合物顆粒可被光線折射,發生偏轉;而這種偏轉的角度可因光線波長和顆粒大小不同而有所區別;透過測量在入射光的一定角度上覆合物顆粒發出的散射光強度,推匯出溶液中待測物質的濃度。根據測定方式的不同,散射比濁法又分為速率散射比濁法(Rate nephelometry)和終點散射比濁法(End point nephelometry)。
速率散射比濁法是一種抗原、抗體結合的動態測定法。所謂速率是指抗原——抗體在單位時間內結合的速度。速率法是測定最大反應速率,也就是抗原——抗體反應達到最高峰時形成免疫複合物的量。一般這個時間是幾十秒,峰值的高低與待測物質(抗原)的量成正比,而形成峰值的時間與抗體(試劑)的濃度和其與抗原的親和力有關。
終點散射比濁法是觀察抗原和抗體反應達到平衡時,免疫複合物形成的量不再增加,反應體系的濁度不再變化,測定此時的溶液濁度。一般這個過程需要幾十分鐘,複合物的濃度不再受時間變化的影響,應當說是免疫反應的結束,但又不能出現絮狀沉澱影響濁度的判斷。
比色法
用比色法測定時,應取對照品同時操作。除另有規定外,比色法所用的空白係指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液, 然後依次加入等量的相應試劑,並用同樣方法處理。在規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸收度後,按紫外分光光度法項下(1)對照品比較法的計算式計算供試品濃度。
當吸收度和濃度關係不呈線性時,應取數份梯度量的對照品溶液,用溶劑補充至同一體積,顯色後測定各份溶液的吸收度,然後以吸收度與相應的濃度繪製標準曲線,再根據供試品的吸收度在標準曲線上求出其含量。
比色法用比色法測定時,應取對照品同時操作。除另有規定外,比色法所用的空白係指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液, 然後依次加入等量的相應試劑,並用同樣方法處理。在規定的波長處測定對照品和供試品溶液的吸收度後,按紫外分光光度法項下(1)對照品比較法的計算式計算供試品濃度。...
透射比濁法(Turbidimetry):根據Lambert-Beer定律,當一束光線透過帶有微小粒子的懸浮液和膠體溶液時,此溶液受到光散射和光吸收兩個因素影響可使光的強度減弱,減弱的程度與溶液中微小粒子的含量成正比。所以,當光線透過免疫複合物時,由於反應體系中複合物顆粒對光線的反射和吸收,引起透射光減少,測量透過反應體系後的透射光照到光電倍增管的光強度,或者測定反應體系的吸光度,推匯出溶液中待測物質的濃度。
散射比濁法(Nephelometry):根據Rayleigh定律,粒子被光照射後而發光,發光的輕度與粒子的大小以及照射光的角度有關。當光線透過免疫複合物時,由於反應體系中複合物顆粒可被光線折射,發生偏轉;而這種偏轉的角度可因光線波長和顆粒大小不同而有所區別;透過測量在入射光的一定角度上覆合物顆粒發出的散射光強度,推匯出溶液中待測物質的濃度。根據測定方式的不同,散射比濁法又分為速率散射比濁法(Rate nephelometry)和終點散射比濁法(End point nephelometry)。
速率散射比濁法是一種抗原、抗體結合的動態測定法。所謂速率是指抗原——抗體在單位時間內結合的速度。速率法是測定最大反應速率,也就是抗原——抗體反應達到最高峰時形成免疫複合物的量。一般這個時間是幾十秒,峰值的高低與待測物質(抗原)的量成正比,而形成峰值的時間與抗體(試劑)的濃度和其與抗原的親和力有關。
終點散射比濁法是觀察抗原和抗體反應達到平衡時,免疫複合物形成的量不再增加,反應體系的濁度不再變化,測定此時的溶液濁度。一般這個過程需要幾十分鐘,複合物的濃度不再受時間變化的影響,應當說是免疫反應的結束,但又不能出現絮狀沉澱影響濁度的判斷。