DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.也可用0.15 MNaCL液反覆洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些. 以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去汙劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA. （2）.陰離子去汙劑法: 用SDS或二甲苯酸鈉等去汙劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去汙劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去汙劑提取DNA. （3）.苯酚抽提法: 苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相.離心分層後取出水層,多次重複操作,再合併含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA .此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 . （ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.
DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖盪,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位於上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉澱出來.也可用0.15 MNaCL液反覆洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較,後種方法使核酸降解可能少一些. 以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去汙劑,如SDS可有助於蛋白質與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,並稱SSC溶液,提取DNA. （2）.陰離子去汙劑法: 用SDS或二甲苯酸鈉等去汙劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由於細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去汙劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去汙劑提取DNA. （3）.苯酚抽提法: 苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由於蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶於酚相,而DNA溶於水相.離心分層後取出水層,多次重複操作,再合併含DNA 的水相,利用核酸不溶於醇的性質,用乙醇沉澱DNA .此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 . （ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解於水的性質,將組織細胞破碎後,用低鹽溶液除去RNA,然後將沉澱溶於水中,使DNA充分溶解於水中,離心後收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然後分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,最後在空氣中乾燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.