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2021-01-29 13:15
單克隆抗體植入小鼠腹腔和體外培養哪種方法好?
11
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1 # 使用者6264144058043
1、單抗的大規模製備 目前大量製備單抗的方法主要有兩大系統,一是動物體內生產法,這是國內外實驗室所廣泛採用;另一是體外培養法。
(1) 動物體內生產單抗的方法 迄今為止,通常情況下均採用動物體內生產單抗的方法,鑑於絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然首選BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種於小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,併產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純後才能使用,而且還有汙染動物病毒的危險,故而最好用SPF級小鼠。(2) 體外培養生產單抗的方法 總體上講,雜交瘤細胞系並不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室最常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然後收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用於單抗的大規模生產。要想在體外大量製備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。
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(1) 動物體內生產單抗的方法 迄今為止,通常情況下均採用動物體內生產單抗的方法,鑑於絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然首選BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種於小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,併產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純後才能使用,而且還有汙染動物病毒的危險,故而最好用SPF級小鼠。(2) 體外培養生產單抗的方法 總體上講,雜交瘤細胞系並不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室最常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然後收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用於單抗的大規模生產。要想在體外大量製備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。