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  • 1 # 玉萍7914

    一切問題,還是用辯證的觀點來看待吧!

    ELISA,全名為酶聯免疫吸附試驗,由英文名稱enzyme linked immunosorbent assay翻譯而來。

    Elisa的主要基本原理是——首先,使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,並保持它的免疫活性。

    接下來,使抗原或抗體與某種酶連線成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。

    然後,在測定時,把待檢測的物質和酶標抗原或抗體按照一定的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

    在這些步驟中,用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其他物質分開,最後結合在固相載體上的酶量將會與標本中受檢物質的量成一定的比例。

    透過加入一種酶反應的底物後,底物被酶催化變為有色產物,產物的量與待檢測的物質的量直接相關,所以可根據顏色反應的深淺進行定性或定量的分析待測物質,在定性方面,也就是說是陰性還是陽性;在定量方面,可以計算出它的數值。

    總的來說,只要理解了這個原理,對於全面知曉ELISA是做什麼的就容易的多了。

    如果您購買了相應的試劑盒,那麼,相對而言,只要有一臺比較先進的酶標儀,完全按照試劑盒裡的說明書來做,還真是不難,只要有點化學和生物基礎的人都能做的來。

    但是,如果一切都需要自己去製備的話,那麼整個流程不是繁瑣,而是複雜,就拿抗體來說,製備抗體,可能會涉及到飼養小動物,特別是白鼠,對它注射抗原,用抗原來激發白鼠體內產生抗體,將白鼠解剖後取出相應的抗體,再透過雜交瘤細胞進行單克隆抗體的複製,最終得到的血清可以說是抗體的半成品,但這個抗體是否有效,還有待於實驗來決定。其實這些步驟也相當於是發明一個試劑盒一般都會經過的步驟。

    如果您想將ELISA做好,那還真要費一番功夫了!

    再普及一下,ELISA方法多有以下幾種型別:雙抗體夾心法、雙位點一步法、間接法測抗體、競爭法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和生物素的ELISA,但萬變不離其中,只要您對原理十分清楚,用哪種方法就看您的實驗需要了。

    如果在這方面您還有其他疑惑都可以來問我,希望以上的回答對您有幫助!

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