注意:完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排淨空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是:關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05MPa時，開啟放氣閥，放出空氣，待壓力錶指標歸零後，再關閉放氣閥。關閥再通電後，壓力錶上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1~0.15MPa 20分鐘。 到達保壓時間後，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零後，才能開蓋，取出培養基，擺在平臺上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養基成分變化，以至培養基無法擺斜面 。一旦放置過久，由於鍋爐內有負壓，蓋子打不開，只要將放氣閥開啟，大氣壓入，內外壓力平衡，蓋子便易打開了。 對高壓滅菌後不變質的物品，如無菌水、栽培介質、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間。 操作步驟 1.首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。 2.放回滅菌桶，並裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋溼包口的紙而透入棉塞。 3.加蓋，並將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓鬆緊一致，勿使漏氣。 4.用電爐或煤氣加熱，並同時開啟排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1.05kg/cm2，121.3℃，20分鐘滅菌。 5.滅菌所需時間到後，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力錶的壓力降至0時，開啟排氣閥，旋鬆螺栓，開啟蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，開啟排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由於內外壓力不平衡而衝出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生汙染。 6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。
注意:完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排淨空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是:關閉放氣閥，通電後，待壓力上升到0.05MPa時，開啟放氣閥，放出空氣，待壓力錶指標歸零後，再關閉放氣閥。關閥再通電後，壓力錶上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1~0.15MPa 20分鐘。 到達保壓時間後，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零後，才能開蓋，取出培養基，擺在平臺上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養基成分變化，以至培養基無法擺斜面 。一旦放置過久，由於鍋爐內有負壓，蓋子打不開，只要將放氣閥開啟，大氣壓入，內外壓力平衡，蓋子便易打開了。 對高壓滅菌後不變質的物品，如無菌水、栽培介質、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質或效力降低，不能隨意延長時間。 操作步驟 1.首先將內層滅菌桶取出，再向外層鍋內加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。 2.放回滅菌桶，並裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋溼包口的紙而透入棉塞。 3.加蓋，並將蓋上的排氣軟管插入內層滅菌桶的排氣槽內。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓鬆緊一致，勿使漏氣。 4.用電爐或煤氣加熱，並同時開啟排氣閥，使水沸騰以排除鍋內的冷空氣。待冷空氣完全排盡後，關上排氣閥，讓鍋內的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當鍋內壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。本實驗用 1.05kg/cm2，121.3℃，20分鐘滅菌。 5.滅菌所需時間到後，切斷電源或關閉煤氣，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力錶的壓力降至0時，開啟排氣閥，旋鬆螺栓，開啟蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時，開啟排氣閥，就會因鍋內壓力突然下降，使容器內的培養基由於內外壓力不平衡而衝出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養基而發生汙染。 6.將取出的滅菌培養基放入 37℃溫箱培養24小時，經檢查若無雜菌生長，即可待用。