實驗原理 DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長進行分光測定DNA濃度，OD值為1相當於大約50μg/ml雙鏈DNA。如用25px光徑，用 H2O稀釋DNA/RNA樣品n倍並以H2O為空白對照，根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度：DNA（ug/ml）=50×OD260讀數×稀釋倍數。RNA（ug/ml）=40×OD260讀數×稀釋倍數。DNA/RNA純品的OD260/OD280為1.8或2.0，故根據OD260/OD280的值可以估計DNA的純度。若比值較高說明含有RNA，比值較低說明有殘餘蛋白質存在。OD230/OD260的比值應在0.4-0.5之間，若比值較高說明有殘餘的鹽存在.本實驗室機器顯示是OD260\OD230，則比值應在2-2.5之間，偏小則說明有殘餘鹽剩餘。 實驗步驟 1. 將製備的DNA懸浮溶解於TE緩衝液中[pH8.O, 1Ommo1/L的Tris緩衝液,內含〈1mmol/L EDTA〉]或懸浮溶解在滅菌水中(依據DNA含量加水)。2. 用可掃描的紫外分光光度計測定製備的DNA/RNA的紫外吸收曲線，測定OD260和OD280，並計算比值：OD260/OD280，純DNA的此比值約為1.8～2.0。純RNA的此比值約為大於2.0。3. 根據：每毫升1微克的純DNA的OD260值= 0.020，計算所得DNA的純度；每毫升1微克的純RNA的OD260值= 0.025，計算所得RNA的純度； 並討論純度較低的原因和解決辦法。260、320、230、280nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，只看OD260/OD280（Ratio，R）。DNA: OD260/OD280比值應接近1.80，若R值大於1.8。說明存在RNA，可重新用RNaseA處理,酚:氯仿:異戊醇(23:24:1)抽提。若R值小於1.8，則說明有蛋白質等雜質存在，需再用蛋白酶K、SDS及盼、氯仿、異戊醇重新對DNA進行純化（也可加入1/8體積的3M NaAc(pH5.2)與冷乙醇一同促使DNA沉澱析出。RNA: OD260/OD280比值在1.8-2.0時，認為RNA中蛋白或者時其他有機物的汙染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩衝液檢測吸光度時，R值可能會大於2（一般應該是<2.2的）。當R<1.8時，溶液中蛋白或者時其他有機物的汙染比較明顯，你可以根據自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時，說明RNA已經水解成單核酸了。注意事項：1. 有用品均需要高溫高壓，以滅活殘餘的DNA酶/RNA酶。2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製，RNA均用DEPC處理的水。3. 用大口滴管或吸頭操作，以儘量減少打斷DNA的可能性。
實驗原理 DNA/RNA在260nm處有最大的吸收峰，蛋白質在280nm處有最大的吸收峰，鹽和小分子則集中在230nm處。因此，可以用260nm波長進行分光測定DNA濃度，OD值為1相當於大約50μg/ml雙鏈DNA。如用25px光徑，用 H2O稀釋DNA/RNA樣品n倍並以H2O為空白對照，根據此時讀出的OD260值即可計算出樣品稀釋前的濃度：DNA（ug/ml）=50×OD260讀數×稀釋倍數。RNA（ug/ml）=40×OD260讀數×稀釋倍數。DNA/RNA純品的OD260/OD280為1.8或2.0，故根據OD260/OD280的值可以估計DNA的純度。若比值較高說明含有RNA，比值較低說明有殘餘蛋白質存在。OD230/OD260的比值應在0.4-0.5之間，若比值較高說明有殘餘的鹽存在.本實驗室機器顯示是OD260\OD230，則比值應在2-2.5之間，偏小則說明有殘餘鹽剩餘。 實驗步驟 1. 將製備的DNA懸浮溶解於TE緩衝液中[pH8.O, 1Ommo1/L的Tris緩衝液,內含〈1mmol/L EDTA〉]或懸浮溶解在滅菌水中(依據DNA含量加水)。2. 用可掃描的紫外分光光度計測定製備的DNA/RNA的紫外吸收曲線，測定OD260和OD280，並計算比值：OD260/OD280，純DNA的此比值約為1.8～2.0。純RNA的此比值約為大於2.0。3. 根據：每毫升1微克的純DNA的OD260值= 0.020，計算所得DNA的純度；每毫升1微克的純RNA的OD260值= 0.025，計算所得RNA的純度； 並討論純度較低的原因和解決辦法。260、320、230、280nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，只看OD260/OD280（Ratio，R）。DNA: OD260/OD280比值應接近1.80，若R值大於1.8。說明存在RNA，可重新用RNaseA處理,酚:氯仿:異戊醇(23:24:1)抽提。若R值小於1.8，則說明有蛋白質等雜質存在，需再用蛋白酶K、SDS及盼、氯仿、異戊醇重新對DNA進行純化（也可加入1/8體積的3M NaAc(pH5.2)與冷乙醇一同促使DNA沉澱析出。RNA: OD260/OD280比值在1.8-2.0時，認為RNA中蛋白或者時其他有機物的汙染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩衝液檢測吸光度時，R值可能會大於2（一般應該是<2.2的）。當R<1.8時，溶液中蛋白或者時其他有機物的汙染比較明顯，你可以根據自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時，說明RNA已經水解成單核酸了。注意事項：1. 有用品均需要高溫高壓，以滅活殘餘的DNA酶/RNA酶。2. 所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配製，RNA均用DEPC處理的水。3. 用大口滴管或吸頭操作，以儘量減少打斷DNA的可能性。