轉化後轉化子長不出來有幾種情況：

1，感受態存放時間過長導致細菌活力很低。

2，感受態效率太低，質粒沒有轉進感受態細胞中，使大腸桿菌在篩選平板上不能生長。

3，所轉化的重組質粒對大腸桿菌生長有影響，造成生長緩慢。

4，篩選平板用錯了或者抗生素加錯了（如果是抗性篩選的話）其他的還沒想到，想到再說。如果你確定上面沒有以上問題，不妨過夜培養看看。至於中途放到4度5分鐘…幾乎不會有影響，除非是溫度敏感的菌株。再有，你所謂的環狀dna是指質粒麼…是的話，它並不是大腸桿菌生長所必須的，但是如果它帶有篩選標記的話，對於大腸桿菌在篩選平板上生長就是必須的。

要看你是什麼細胞，是想過表達還是knock down一個基因，穩轉還是瞬轉。

細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等匯入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷髮展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。

方法

脂質體轉染法

陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根透過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂複合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再透過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用於把DNA轉染入懸浮或貼壁培養細胞中，是目前實驗室最方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優於磷酸鈣法。由於脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞型別：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。

電穿孔轉染法

電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或兒乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞。現在針對細胞死亡開發出了一種電轉保護劑，可以大大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率。

病毒感染

對於脂質體轉染與電穿孔轉染都無法成功轉染的細胞系建議用病毒感染，此法可以快速100%感染，檢測成功率高。

常用步驟

1. 轉染試劑的準備

① 將400ul去核酸酶水加入管中，震盪10秒鐘，溶解脂狀物。

② 震盪後將試劑放在－20攝氏度儲存，使用前還需震盪。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體[1] 體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震盪後在加入合適體積的轉染試劑，再次震盪。

3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。

4. 吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。

5. 加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。

6. 到時後，根據細胞種類決定是否移除混合液，之後加入完全培養基繼續培養24－48小時。