ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決辦法
1 選擇試劑 選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。 解決辦法： 1） 標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，採血後必須立即顛倒採血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣後及時放入孵箱。 3) 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸乾。 4) 如果採用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。 3 孵育 可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附於反應孔周圍，難以清洗徹底。 解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。 4 洗板 可能原因： 1) 採用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 採用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後最好在吸水紙（選擇乾淨、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍幹； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體迴流。 解決辦法： 1) 顯色劑儘量在臨用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械。 6 終止 可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。 7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 儘可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對於實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。
ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，並給出相應的解決辦法
1 選擇試劑 選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。 解決辦法： 1） 標本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時後，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，採血後必須立即顛倒採血管混合5-10次，放置一段時間後，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置於-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣後及時放入孵箱。 3) 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表面輕拭吸乾。 4) 如果採用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。 3 孵育 可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附於反應孔周圍，難以清洗徹底。 解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。 4 洗板 可能原因： 1) 採用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 採用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。 解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板後最好在吸水紙（選擇乾淨、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍幹； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。5 顯色 可能原因： 1) 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體迴流。 解決辦法： 1) 顯色劑儘量在臨用前配製，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械。 6 終止 可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。 7 讀板 如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 儘可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對於實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。