剛好最近在做這個。。。正在摸索合適的抗體濃度就是一種蛋白質的電泳分離，跑膠現在常見的是SDS-PAGE(SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳)

1、利用帶大量負電荷的SDS與蛋白結合，形成SDS-蛋白質複合物，從而可以忽略不同蛋白所帶電荷對於蛋白在電場中移動速度的影響，使其移動速度只與分子量相關

2、利用聚丙烯醯胺凝膠內部大小不一的孔徑，使得小分子快速透過，大分子受小孔徑阻擋跑的慢，從而形成跟分子量有關的梯度條帶

3、利用溴酚藍這種有色小分子指示劑與樣本混合，從而使不可見的蛋白電泳過程可監控，即：當跑在前沿位置的溴酚藍到達凝膠底部時，即可停止電泳

4、利用可見，並已知各條帶所對應蛋白分子質量的Marker蛋白作為標尺，相同分子質量蛋白會在凝膠中跑在相同水平，可以幫助你定位目標蛋白的大概位置

轉膜現在常用的是電泳印跡法，這個沒什麼特別的

1、有孔的塑膠和有機玻璃板將凝膠和NC膜夾成“三明治”，使蛋白質在電場力的作用下離開凝膠結合到NC膜上

2、轉移後的NC膜就稱為一個印跡（blot）,用於對蛋白質的進一步檢測

封閉：顧名思義，一般用小牛血清或者脫脂奶粉配的溶液，封閉NC膜上剩餘的疏水結合位點，使得最後顯影背景乾淨附抗體

1、一抗與目標蛋白結合特異性強，二抗與一抗結合特異性稍弱，帶有標記的二抗與一抗結合形成抗體複合物

2、帶有標記的二抗，即：酶連抗體，使用的酶通常是鹼性磷酸酶或辣根過氧化物酶。鹼性磷酸酶可以將無色的底物5-溴-4-氯吲哚磷酸鹽轉化為藍色的產物。我們用辣根過氧化物酶的方法是用增強化學發光法，往膜上滴加發光液後，氧化化學發光物質魯米諾併發光，透過將印跡放在照相底片上感光就可以檢測出辣根過氧化物酶的存在，即目標蛋白質的存在了。

3、照片中條帶的灰度值不同代表蛋白量不同