需要知道DNA濃度、DNA片段長度。即可換算成複製數
1A260 吸光度值=ds DNA 50 ug/ml=ss DNA 33 ug/ml=ss RNA 40 ug/ml
核酸濃度=(OD260) x (dilution factor) x [33 或40或50]= ng/ul
MW 代表 克/摩爾,單位dolton:1dolton即表示 1g/mol
1 摩爾= 6.02 x 10(23)次摩爾分子(複製數)
平均分子量(MW):
dsDNA=(鹼基數) x (660 道爾頓/鹼基)
ssDNA=(鹼基數) x (330 道爾頓/鹼基)
ssRNA=(鹼基數) x (340 道爾頓/鹼基)
得到複製數計算公式:
(6.02 x 10(23)次複製數/摩爾) x (濃度) / (MW g/mol) = copies/ml.
即:
(6.02 x 10(23)) x (g/ml) / (DNA length x 660) = copies/ml.
或
(6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul.
總之,如果DNA/RNA的量是ng/ul,那麼複製數(copies/ul)=[(ng數×10的-9次方)×(6.02×10的23次方)]÷(鹼基數×345)
例:
3000 鹼基質粒,濃度100 ng/ul ,MW= 3000 bp x 660 dalton/bp =1.98 x 10(6) daltons,即1 mol =1.98 x 10(6) g。
[ 100ng x 10(-9) ] g / 1.98 x 10(6) = 摩爾數 copy數= 摩爾數 x 6.02 x 10(23)= 3x 10(10) copies/ul.
需要知道DNA濃度、DNA片段長度。即可換算成複製數
1A260 吸光度值=ds DNA 50 ug/ml=ss DNA 33 ug/ml=ss RNA 40 ug/ml
核酸濃度=(OD260) x (dilution factor) x [33 或40或50]= ng/ul
MW 代表 克/摩爾,單位dolton:1dolton即表示 1g/mol
1 摩爾= 6.02 x 10(23)次摩爾分子(複製數)
平均分子量(MW):
dsDNA=(鹼基數) x (660 道爾頓/鹼基)
ssDNA=(鹼基數) x (330 道爾頓/鹼基)
ssRNA=(鹼基數) x (340 道爾頓/鹼基)
得到複製數計算公式:
(6.02 x 10(23)次複製數/摩爾) x (濃度) / (MW g/mol) = copies/ml.
即:
(6.02 x 10(23)) x (g/ml) / (DNA length x 660) = copies/ml.
或
(6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul.
總之,如果DNA/RNA的量是ng/ul,那麼複製數(copies/ul)=[(ng數×10的-9次方)×(6.02×10的23次方)]÷(鹼基數×345)
例:
3000 鹼基質粒,濃度100 ng/ul ,MW= 3000 bp x 660 dalton/bp =1.98 x 10(6) daltons,即1 mol =1.98 x 10(6) g。
[ 100ng x 10(-9) ] g / 1.98 x 10(6) = 摩爾數 copy數= 摩爾數 x 6.02 x 10(23)= 3x 10(10) copies/ul.