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  • 1 # 待花開稻花秋水

    血液基因組DNA提取試劑盒

    操作步驟:

    一、小體積全血操作步驟如下:

    1、向300ul抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的SolutionA,顛倒混勻,12000rpm離心1分鐘,棄掉上清。

    2、再重複步驟1一次,棄掉上清。

    3、按照第3頁附表配製SolutionB與SolutionC的混合液(SolutionB與SolutionC的使用量見附表)。

    4、加入150ul混合液,用移液器吹打均勻,60℃水浴或孵箱孵育10分鐘,孵育期間顛倒混勻一次,溶液由紅色變為黃綠色或棕色。

    5、加入等體積的異丙醇,充分顛倒混勻至出現絲狀或絮狀基因組DNA,12000prm離心1分鐘,棄掉上清。

    6、加入800ul75%酒精,顛倒數次;12000prm離心1分鐘,用移液器吸掉上清,室溫乾燥10~15分鐘。

    7、加入150ulElutionbuffer,60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA,用移液器吹打均勻,-20℃儲存基因組DNA。

    二、中量全血操作步驟如下:1~10ml血量,以3ml血液處理量為例

    1、向3ml抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的SolutionA,顛倒混勻,3000rpm離心5分鐘,棄掉上清。

    2、再重複步驟1一次,棄掉上清。

    3、按照第3頁附表配製SolutionB與SolutionC的混合液(SolutionB與SolutionC的使用量見附表)。

    4、加入1.5ml混合液,用1ml移液器或者一次性塑膠吸管吹打均勻,60℃水浴或孵箱孵育10分鐘,孵育期間顛倒混勻一次,溶液由紅色變為黃綠色或棕色。

    5、加入等體積的異丙醇,充分顛倒混勻至出現絲狀或絮狀基因組DNA。

    6、用移液器將絮狀物移到加有800ul75%酒精的1.5mlEP管中,顛倒數次,12000prm離心3分鐘,棄掉上清,室溫乾燥10~15分鐘。

    7、加入500ulElutionbuffer,60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA,用移液器吹打均勻,-20℃儲存基因組DNA。

    三、大量全血操作步驟如下:10~20ml血量,以10ml血液處理量為例

    1、向10ml抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的SolutionA,顛倒混勻,8000rpm離心5分鐘,棄掉上清;

    2、再重複步驟1一次,棄掉上清。

    3、按照第3頁附表配製SolutionB與SolutionC的混合液(SolutionB與SolutionC的使用量見附表);

    4、加入5ml混合液,用一次性塑膠吸管吹打均勻,60°C水浴或孵箱孵育10分鐘,孵育期間顛倒混勻一次,溶液由紅色變為黃綠色或棕色。

    5、加入等體積的異丙醇,充分顛倒混勻至出現絲狀或絮狀基因組DNA;

    6、用移液器將絮狀物移到加有800ul75%酒精的1.5mlEP管中,顛倒數次,12000prm離心1分鐘,棄掉上清,室溫乾燥10~15分鐘;

    7、加入1000ulElutionbuffer,60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA,用移液器或一次性塑膠吸管吹打均勻,-20℃儲存基因組DNA。

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