一、革蘭氏染色法

不少於兩種染料參與的染色方法稱之為復染法，革蘭氏染色法屬於復染法類的一種染色方法。由結晶紫、碘液、番紅參與，透過染料對細菌的細胞壁的著色，來區分革蘭氏陰性菌與陽性菌的一種方法。

二、主要步驟及關鍵步驟

（1）製片。

取菌種培養物常規塗片、乾燥、固定。

要用活躍生長期的幼培養物作革蘭氏染色；塗片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性；火焰固定不宜過熱（以玻片不燙手為宜）。

（2）初染。

滴加結晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）染色1-2min，水洗。

（3）媒染。

用碘液衝去殘水，並用碘液覆蓋約1min，水洗。

（4）脫色。

用濾紙吸去玻片上的殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流加95%的乙醇脫色，直至流出的乙醇無紫色時，立即水洗。

乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關鍵環節：脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌；脫色過度，陽性菌被誤染成陰性菌。因而脫色時間一般為20-30s。

（5）復染。

用番紅液復染約2min，水洗。

（6）鏡檢。

乾燥後，用油鏡觀察。菌體被染成藍紫色的是革蘭氏陽性菌，被染成紅色的為革蘭氏陰性菌。