一、定義
革蘭氏染色法是由1884年由丹麥醫師gram創立的一種復染色法，用以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，對其進行分類鑑定。
二、染色原理
1、g﹢菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性屏障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。
2、gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯鬆散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘複合物溶出細胞壁，番紅染液復染後呈紅色。
三、染色目的
在細胞發放之前，利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測，判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
四、染色方法步驟
1
、塗片：取滅過菌的載玻片於實驗臺上，用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央，用燒紅冷卻後的接種環將液滴塗布成一均勻的薄層，塗布面不宜過大。
2、
乾燥：將標本面向上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。
3、固定：固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰處儘快的來回透過2-3次，共約2-3秒種，並不時以載玻片背面加熱觸及面板，不覺過燙為宜（不超過
60℃），放置待冷後，進行染色。
4、
初染：在塗片薄膜上滴加草酸銨結晶紫1-2滴，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
5
、水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
6
、媒染：用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在塗片薄膜上，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
7
8
、脫色：斜置載玻片，滴加95%乙醇脫色，至流出的乙醇不現紫色為止，大約需時20-30s，隨即水洗。
9
、復染：在塗片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
10
11
、乾燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標本片幹後置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發現目的物後滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀察細菌的形態及顏色，紫色的是革蘭氏陽性菌，紅色的是革蘭氏陰性菌。
五、注意事項
1、革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受塗片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規定。
2、染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。
3、選用幼齡的細菌。g+菌培養12h-16h，e.coli培養24h。若菌齡太老，由於菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。
一、定義
革蘭氏染色法是由1884年由丹麥醫師gram創立的一種復染色法，用以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵，對其進行分類鑑定。
二、染色原理
1、g﹢菌：細胞壁厚，肽聚糖網狀分子形成一種透性屏障，當乙醇脫色時，肽聚糖脫水而孔隙縮小，故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。
2、gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯鬆散，乙醇脫色不能使其結構收縮，其脂含量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結晶紫-碘複合物溶出細胞壁，番紅染液復染後呈紅色。
三、染色目的
在細胞發放之前，利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測，判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。
四、染色方法步驟
1
、塗片：取滅過菌的載玻片於實驗臺上，用移液槍吸取10ul待檢樣品滴在載玻片的中央，用燒紅冷卻後的接種環將液滴塗布成一均勻的薄層，塗布面不宜過大。
2、
乾燥：將標本面向上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。
3、固定：固定常常利用高溫，手持載玻片的一端，標本向上，在酒精燈火焰處儘快的來回透過2-3次，共約2-3秒種，並不時以載玻片背面加熱觸及面板，不覺過燙為宜（不超過
60℃），放置待冷後，進行染色。
4、
初染：在塗片薄膜上滴加草酸銨結晶紫1-2滴，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
5
、水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
6
、媒染：用100-1000ul移液槍吸取約300ul碘液滴在塗片薄膜上，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
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、水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
8
、脫色：斜置載玻片，滴加95%乙醇脫色，至流出的乙醇不現紫色為止，大約需時20-30s，隨即水洗。
9
、復染：在塗片薄膜上滴加沙黃染液1-2滴，使染色液覆蓋塗片，染色約1min。
10
、水洗：斜置載玻片，在自來水龍頭下用小股水流沖洗，直至洗下的水呈無色為止。
11
、乾燥、觀察：用吸水紙吸掉水滴，待標本片幹後置顯微鏡下，用低倍鏡觀察，發現目的物後滴一滴浸油在玻片上，用油鏡觀察細菌的形態及顏色，紫色的是革蘭氏陽性菌，紅色的是革蘭氏陰性菌。
五、注意事項
1、革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受塗片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規定。
2、染色過程中勿使染色液乾涸。用水沖洗後，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。
3、選用幼齡的細菌。g+菌培養12h-16h，e.coli培養24h。若菌齡太老，由於菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。