先用蛋白酶和肽酶處理得到氨基酸,然後用有機溶劑萃取,再進行分餾。
一,植物中游離氨基酸的提取;
1,烘乾材料中游離氨基酸的提取:
從植物的葉片、葉脈及種子中提取遊離氨基酸一般先需要乾燥處理,葉片、葉脈要在105~110攝氏度殺青,然後60~80攝氏度烘乾、粉碎,過40目篩。一些研究者用75%或80%的酒精作溶劑從粉碎原料中提取氨基酸,也有用蒸餾水作萃取溶劑提取,提取的方法是常溫或加熱到一定溫度(小於100攝氏度)用一定體積分數的萃取溶劑浸泡2~6h,或加熱迴流20~30min,為了使原料中的遊離氨基酸儘可能得以溶解,提取過程需重複2~3次,然後合併提取液、過濾,蒸發掉乙醇,既得到了氨基酸粗提液。也有人採用蒸餾水作溶劑超聲波提取提取的方法,或在室溫下樣品用50%乙醇浸泡微波萃取,然後離心過濾,若用氨基酸自動分析儀測定氨基酸的含量,常用2%~5%的磺基水楊酸水溶液浸提。
2,鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取:
鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取鮮葉片或鮮果肉一般用10%CH3COOH研磨或勻漿來進行提取,但由於鮮葉片或鮮果肉中的蛋白酶能水解蛋白質,造成遊離氨基酸含量升高,故研磨要在冰浴中進行,新鮮材料中的脂、蛋白質、糖等易被提出,需加入一定的試劑除去。通常用10%三氯乙酸、一定濃度的醋酸鉛、磺基水楊酸或95%乙醇加入過夜沉澱,然後離心或過濾的方法除去蛋白質,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂類等。
二,遊離氨基酸的純化;
從植物中提取的氨基酸粗提液中含有較多的色素、可溶性糖、有機酸及其他雜質,有必要對氨基酸粗提液進一步進行純化,以便下一步進行氨基酸含量的測定。
最常用的純化方法是用732陽離子交換樹脂進行純化。
先用蛋白酶和肽酶處理得到氨基酸,然後用有機溶劑萃取,再進行分餾。
一,植物中游離氨基酸的提取;
1,烘乾材料中游離氨基酸的提取:
從植物的葉片、葉脈及種子中提取遊離氨基酸一般先需要乾燥處理,葉片、葉脈要在105~110攝氏度殺青,然後60~80攝氏度烘乾、粉碎,過40目篩。一些研究者用75%或80%的酒精作溶劑從粉碎原料中提取氨基酸,也有用蒸餾水作萃取溶劑提取,提取的方法是常溫或加熱到一定溫度(小於100攝氏度)用一定體積分數的萃取溶劑浸泡2~6h,或加熱迴流20~30min,為了使原料中的遊離氨基酸儘可能得以溶解,提取過程需重複2~3次,然後合併提取液、過濾,蒸發掉乙醇,既得到了氨基酸粗提液。也有人採用蒸餾水作溶劑超聲波提取提取的方法,或在室溫下樣品用50%乙醇浸泡微波萃取,然後離心過濾,若用氨基酸自動分析儀測定氨基酸的含量,常用2%~5%的磺基水楊酸水溶液浸提。
2,鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取:
鮮葉片或鮮果肉中游離氨基酸的提取鮮葉片或鮮果肉一般用10%CH3COOH研磨或勻漿來進行提取,但由於鮮葉片或鮮果肉中的蛋白酶能水解蛋白質,造成遊離氨基酸含量升高,故研磨要在冰浴中進行,新鮮材料中的脂、蛋白質、糖等易被提出,需加入一定的試劑除去。通常用10%三氯乙酸、一定濃度的醋酸鉛、磺基水楊酸或95%乙醇加入過夜沉澱,然後離心或過濾的方法除去蛋白質,用乙酸乙酯或乙醚萃取以除去脂類等。
二,遊離氨基酸的純化;
從植物中提取的氨基酸粗提液中含有較多的色素、可溶性糖、有機酸及其他雜質,有必要對氨基酸粗提液進一步進行純化,以便下一步進行氨基酸含量的測定。
最常用的純化方法是用732陽離子交換樹脂進行純化。