一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:1)塗片固定。2)草酸銨結晶紫染1分鐘。3)自來水沖洗。4)加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。5)水洗,用吸水紙吸去水分。6)加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分。7)蕃紅染色液(稀)染1分鐘後,自來水沖洗。乾燥,鏡檢。
具體試驗 流程
1、 取載玻片用紗布擦乾,載玻片的一面用marker筆畫一個小圈(用來大致確定菌液滴的位置)。塗菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。 2、 塗片:液體培養基:左手持菌液試管,在酒精燈火焰附近5cm左右開啟管蓋;右手持接種環在火焰中燒灼滅菌,等冷卻後從試管中沾取菌液一環,在潔淨無脂的載玻片上塗直徑2mm左右的塗膜,最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。固體培養基:先在載玻片上滴一滴無菌水,再用接種環取少量菌體,塗在載玻片上,使其薄而均勻。 3、 晾乾:讓塗片在空氣中自然乾燥。 4、 固定:讓菌膜朝上,透過火焰2-3次固定(以不燙手為宜)。 5、 染色:將固定過的塗片放報紙上,滴加草酸銨結晶紫液,染1min。 6、 水洗:用水緩慢沖洗塗片上的染色液,用吸水紙吸乾。簡單染色結束可觀察細胞形態。 7、 媒染:滴加1滴碘液,染1min,水洗。 8、 脫色:吸去殘留水,連續滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色,立即水洗。 9、 復染:滴加蕃紅復染3-5min,水洗。至此,革蘭氏染色結束。
結果:革蘭氏陽性菌呈藍紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色。
其重要的臨床意義在於:1.鑑別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關:革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素;而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖,兩者的致病作用不同。
一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:1)塗片固定。2)草酸銨結晶紫染1分鐘。3)自來水沖洗。4)加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。5)水洗,用吸水紙吸去水分。6)加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分。7)蕃紅染色液(稀)染1分鐘後,自來水沖洗。乾燥,鏡檢。
具體試驗 流程
1、 取載玻片用紗布擦乾,載玻片的一面用marker筆畫一個小圈(用來大致確定菌液滴的位置)。塗菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂。 2、 塗片:液體培養基:左手持菌液試管,在酒精燈火焰附近5cm左右開啟管蓋;右手持接種環在火焰中燒灼滅菌,等冷卻後從試管中沾取菌液一環,在潔淨無脂的載玻片上塗直徑2mm左右的塗膜,最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。固體培養基:先在載玻片上滴一滴無菌水,再用接種環取少量菌體,塗在載玻片上,使其薄而均勻。 3、 晾乾:讓塗片在空氣中自然乾燥。 4、 固定:讓菌膜朝上,透過火焰2-3次固定(以不燙手為宜)。 5、 染色:將固定過的塗片放報紙上,滴加草酸銨結晶紫液,染1min。 6、 水洗:用水緩慢沖洗塗片上的染色液,用吸水紙吸乾。簡單染色結束可觀察細胞形態。 7、 媒染:滴加1滴碘液,染1min,水洗。 8、 脫色:吸去殘留水,連續滴加95%乙醇脫色20-30s至流出液無紫色,立即水洗。 9、 復染:滴加蕃紅復染3-5min,水洗。至此,革蘭氏染色結束。
結果:革蘭氏陽性菌呈藍紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色。
其重要的臨床意義在於:1.鑑別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關:革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素;而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖,兩者的致病作用不同。