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  • 1 # fdfar1185

    動物細胞貼壁培養的方法有組織塊培養法和消化培養法。貼壁細胞培養方法操作步驟:

    1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭乾淨,不要用紗布;

    2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

    3.在距離紫外燈直射範圍內20-30釐米處照射2-3小時;

    4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片完全浸在培養液中;

    5.將培養板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 實驗要點及說明:1.本方法適用於貼壁細胞培養,而不適用於懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃製造,並經過鉻酸洗液處理; 3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕; 4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加汙染機率; 5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘並自然晾乾。貼壁培養的優點:容易更換培養液;細胞緊密黏附於固相表面,可直接傾去舊培養液,清洗後直接加入新培養液。容易採用灌注培養,從而達到提高細胞密度的目的;因細胞固定表面,不需過濾系統。當細胞貼壁於生長基質時,很多細胞將更有效的表達一種產品。同一裝置可採用不同的培養液/細胞的比例。適用於所有型別細胞。 貼壁培養的缺點:與懸浮培養法相比擴大培養比較困難,投資大;佔地面積大;不能有效監測細胞的生長;

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