1．稱取2～5g新鮮菠菜幼嫩組織或小麥黃花苗等植物材料，用自來水、蒸餾水先後沖洗葉面，用濾紙吸乾水分備用。葉片稱重後剪成1cm長，置研缽中，經液氮冷凍後研磨成粉末。待液氮蒸發完後，加入15ml預熱（60～65℃）的ctab提取緩衝液，轉入一磨口錐形瓶中，置於65℃水浴保溫，0.5~1h，不時地輕輕搖動混勻。

2．加等體積的氯仿/異戊醇(24:1)，蓋上瓶塞，溫和搖動，使成乳狀液。

3．將錐形瓶中的液體倒入離心管中，在室溫下4000r/min離心5min，靜置，離心管中出現3層，小心地吸取含有核酸的上層清液於量筒中，棄去中間層的細胞碎片和變性蛋白以及下層的氯仿。

4．根據需要，上清液可用氯仿/異戊醇反覆提取多次。

5．收集上層清液，並將其倒入小燒杯。沿燒杯壁慢慢加入1～2倍體積預冷的95％乙醇，邊加邊用細玻棒沿同一方向攪動，可看到纖維狀的沉澱（主要為dna）迅速纏繞在玻棒上。小心取下這些纖維狀沉澱，加1～2ml70%乙醇沖洗沉澱，輕搖幾分鐘，除去乙醇，即為dna粗製品。

6．上述dna粗製品含有一定量的rna和其它雜質。若要製取較純的dna，可將粗製品溶於te緩衝液中，加入10mg/ml的rnase溶液，使其終濃度達50μg/ml，混合物於37℃水浴中保溫30min除去rna。重複步驟2～5的操作，可製得較純的dna製品。

7．將dna製品溶於250μl的te緩衝液中，完全溶解dna樣品。

8．加入1/10倍體積的3mol/lnaac（ph6.8）和2倍體積的95％乙醇，沉澱dna，重複步驟5。最後，將dna溶於250μl的te緩衝液中。

9．在751型分光光度計上測定該溶液在260nm紫外光波長下的光密度值。代入下式計算dna的含量。

結果計算

式中od260nm為260nm處的光密度；l為比色杯光徑（cm）；0.020為1μg/mldna鈉鹽的光密度。

dna的紫外吸收高峰為260nm，吸收低峰為230nm，而蛋白質的紫外吸收高峰為280nm。上述dna溶液適當稀釋後，在751分光光度計上測定其odnm、odnm和odnm。如odnm/odnm≥2odnm/odnm≥1.8，表示rna已經除淨，蛋白含量不超過0.3％。

附註

如果植物樣品不經液氮處理，提取液中的ctab濃度需要提高到4%（w/v）。在許多情況下，使用0.1%（v/v）巰基乙醇，並不能完全抑制葉片中的氧化作用，但是，這種氧化作用不會影響限制性內切酶的活性。如果使用的巰基乙醇濃度高於0.1%（v/v），則會大大降低dna的得率。

1．製備的dna在：（1）含有螯和劑如edta中較穩定，因為edta能螯和mg或mn離子，抑制dnase；（2）在ph5～9之間較穩定，否則過酸過鹼會破壞dna的結構；

（3）有一定離子強度（強度越高,dna越穩定）的溶液中較穩定。

（te滿足以上要求,但如需對所得dna進行酶切,edta濃度不可過高,一般用0.1×te或0.2×te）。

2．為了保證植物dna的完整性：（1）整個提取過程應在較低溫度下進行（一般利用液氮或冰浴）；這樣可防止和抑制內源dnase對dna的降解；（2）當dna處於溶解狀態時，要儘量減弱溶液的渦旋，動作要輕柔；在進行dna溶液轉移時用大口（或剪口）吸管，儘量減少對溶液中dna的機械剪下破壞

酮戊二酸[1]為運動型營養新增劑,降低術後患者和長期病人的機體損耗,改善各種營養不良狀態。化學名為2-氧代-1,5戊二酸。本品含量測定方法為酸鹼滴定法,未見用高效液相色譜法測定其含量的報導。本文根據文獻[2-5]報導酮戊二酸的水溶液在233nm處有最大紫外吸收光的特點,採用HPL