超氧化物歧化酶（SOD）的催化底物是O2，一般多以一定時間內產物生成量或底物的消耗量作為酶活性單位。由於O2自身很不穩定，且不易製備，測定SOD的方法除少數採用直接法外，一般多為間接法。1.直接法原理是根據O2或產生O2的物質本身的性質測定O2的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈衝輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器裝置價格昂貴，一般較少應用。2.一般化學法這些方法的共同特點是要有一個O2的產生體系和一個被O2還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2被SOD歧化，因而O2還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑制程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。常用的有：⑴鄰苯三酚自氧化法：即改良Marklund法。原理是基於經典的分光光度法，在鹼性條件下，鄰苯三酚自氧化成紅桔酚，用紫外-可見光譜跟蹤波長為325nm、420nm或650nm（經典為420nm），同時產生O2，SOD催化O2發生歧化反應從而抑制鄰苯三酚的自氧化，樣品對鄰苯三酚自氧化速率的抑制率，可反映樣品中的SOD含量。本法具有特異性強，所需樣本量少（僅50μl），操作快速簡單，重複性好，靈敏度高，試劑簡單等優點。⑵細胞色素C還原法（McCord法）：原理是黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶體系中產生的O2使一定量的氧化型細胞色素C還原為還原型細胞色素C，後者在550nm有最大光吸收。在SOD存在時，由於一部分O2被SOD催化而歧化，O2還原細胞色素C的反應速度則相應減少，即其反應受到抑制。將抑制反應的百分數與SOD濃度作圖可得到抑制曲線，由此計算樣品中SOD活性。本法是間接法中的經典方法，但本法靈敏度較低。3.化學發光法原理是黃嘌呤氧化酶在有氧條件下，催化底物黃嘌呤或次黃嘌呤發生氧化反應生成尿酸，同時產生O2。後者可與化學發光劑魯米諾反應，使其產生激發。SOD能清除O2從而抑制魯米諾的化學發光。本法可應用於SOD的微量測定，不僅靈敏度高，簡便易行，而且特異性與準確性至少與細胞色素C還原法類似。4.免疫學方法上述方法測定的是SOD活性，免疫學方法則可測定樣品中SOD的質量，因此特異性較好，是較理想的測定SOD方法，免疫法有放射免疫法、化學發光免疫分析法、ELISA法等。但其缺陷是隻能測定抗體相應的抗原，對於檢測不同種類的SOD，則須製備相應的特異性抗體，手續繁瑣。5.電泳法電泳染色定位法的基本原理是根據光化學法與NBT還原法。電泳則採取垂直板聚丙烯醯胺凝膠電泳。既可採用SOD活性正染色（呈現棕色區帶）也可採取SOD活性負染色（呈現無色透明區帶）。根據凝膠上電泳分離的SOD區帶的著色深淺與面積大小，對樣品進行半定量分析，也可製作校正曲線計算樣品中的SOD含量。染色定位法常用於鑑定SOD，很少為了定量，主要原因是它不及化學法簡便，但鑑定SOD卻較化學法為優。用電泳法可鑑定SOD是否摻有雜質蛋白，有無同工酶，且可半定量地確定SOD的活性大小。6.平行放在距20W熒光燈管3cm處的光照臺上，光照8min後，立即在200A分光光度計的460nm波長下比色。用測得的結果計算樣品中的SOD含量..

1、測定方法很多，常見的有化學法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學法應用最普遍，化學法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產生有色中間物和O2 -，利用SOD分解而間接推算酶活力。

2、在化學方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學發光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學擴增法，Cyte還原法等。

（1）改良的鄰苯三酚自氧化法簡單易行較為實用。

（2）化學發光法和光化學擴增法不適用於測定Mn-SOD，但對於Cu/Zn-SOD反應極靈敏。

（3）Cyte還原法用於Mn-SOD活力測定結果穩定，重複性好。但專一性和靈敏度不夠理想，而且需要特殊儀器，實際應用受到限制。

（4）亞硝酸鹽形成法與CN—抑制劑或SDS處理相結合，應用於Mn-SOD測定，靈敏度比Cyte還原法提高數倍，而且專一性強，重複性好，操作方便，不需要特殊儀器和裝置，易於實際應用和推廣，是目前較好的測定方法之一。