雙縮脲測蛋白質本實驗要顯色30鍾測定）實驗原理雙縮脲（NH3CONHCONH3）兩脲經180℃左右加熱放氨產物強鹼性溶液雙縮脲與CuSO4形紫色絡合物稱雙縮脲反應凡具兩醯胺基或兩直接連線肽鍵或能間碳原相連肽鍵類化合物都雙縮脲反應紫色絡合物顏色深淺與蛋白質濃度比與蛋白質量及氨基酸關故用測定蛋白質含量測定範圍1~10mg蛋白質干擾測定物質主要：硫酸銨、Tris緩衝液某些氨基酸等優點較快速同蛋白質產顏色深淺相近及干擾物質少主要缺點靈敏度差雙縮脲用於需要快速並需要十精確蛋白質測定（二）試劑與器材1.試劑：（1）標準蛋白質溶液：用標準結晶牛血清清蛋白（BSA）或標準酪蛋白配製10mg/ml標準蛋白溶液用BSA濃度1mg/mlA2800.66校其純度需要標準蛋白質預先用微量凱氏定氮測定蛋白氮含量計算其純度再根據其純度稱量配製標準蛋白質溶液牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配製酪蛋白用0．05N NaOH配製（2）雙縮脲試劑：稱1.50克硫酸銅（CuSO4?5H2O）6.0克酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6?4H2O）用500毫升水溶解攪拌加入300毫升10% NaOH溶液用水稀釋1升貯存於塑膠瓶（或內壁塗石蠟瓶）試劑期儲存若貯存瓶黑色沉澱現則需要重新配製2.器材：見光光光度計、試管15支、旋渦混合器等（三）操作1.標準曲線測定：取12支試管兩組別加入00.20.40.60.81.0毫升標準蛋白質溶液用水補足1毫升加入4毫升雙縮脲試劑充搖勻室溫（20~25℃）放置30鍾於540nm處進行比色測定用未加蛋白質溶液第支試管作空白照液取兩組測定平均值蛋白質含量橫座標光吸收值縱座標繪製標準曲線2、品測定：取2~3試管用述同測定未知品蛋白質濃度注意品濃度要超10mg/ml雙縮脲測蛋白質本實驗要顯色30鍾測定