一、細菌製片及簡單染色:
1、塗片
取潔淨的載玻片1張,將其在火焰上微微加熱,除去上面的油脂,冷卻,在中央部位滴加一滴無菌水,用接種環在火焰旁從培養基上挑取少量菌體與水混合。用接種環將菌體塗成直徑約1cm的均勻薄層。注意,取菌量不宜過大,一面造成軍體重疊。
2、乾燥
放在桌面上,待其自然乾燥。
3、固定
將已乾燥的塗片標本向上,在火焰上透過3-4次固定。其目的是殺死細菌;使菌體蛋白質凝固,菌體牢固粘附於載玻片上,染色時不被染液或水沖掉;增加菌體對染料的結合力,使圖片易著色。
4、染色
在塗片上滴加染料1-2滴,使其佈滿塗菌部分,染色1分鐘。
5、沖洗
斜置玻片,傾去染液。用水輕輕衝去染液,至流水變清。注意水流不能直接沖洗塗菌處,以免將塗菌沖洗掉。
6、吸乾
用吸水紙輕輕吸去玻片上的水分,乾燥後鏡檢。
二、酵母菌製片及簡單染色。
水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍後,滴加一滴於載破片中央,無菌操
作取少許菌體置於染色中混勻,蓋上破片後鏡劍。
三、放線菌製片方法(插片法)
1、在馬鈴薯浸汁瓊脂培養基平板上,劃線接入少量放線菌的孢子,在接種線旁傾斜地插入無菌蓋玻片,於28-30℃培養。
2、培養3~4天后,菌絲沿著蓋玻片向上生長,待菌絲長好後,取出蓋玻片放在乾淨的載玻片上,置於顯微鏡下觀察。
四、黴菌製片法
水浸製片法:
1、在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水。
2、用解剖針從生長有黴菌的斜面挑取少量帶有孢子的黴菌菌絲,用50%的乙醇浸潤,再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下,然後放入載玻片上的液滴中,仔細地用解剖針將菌絲分散開來。(也可省略酒精和水浸潤,洗滌)
3、注意取菌時,毛黴和根黴用解剖針挑取少量菌絲即可,青黴和黑麴黴和培養基結合緊密,不易挑取,可連培養基一起挑取,再在染液中分離菌絲。青黴和麴黴的培養時間不宜過長,一般為2-2.5天,以免菌絲與培養基不好剝離。
4、蓋上蓋玻片(勿使產生氣泡,且不要再移動蓋玻片)。(黑麴黴不易觀察到足細胞)
5、鏡檢:先用低倍鏡,必要時轉換高倍鏡鏡檢並記錄觀察結果。
一、細菌製片及簡單染色:
1、塗片
取潔淨的載玻片1張,將其在火焰上微微加熱,除去上面的油脂,冷卻,在中央部位滴加一滴無菌水,用接種環在火焰旁從培養基上挑取少量菌體與水混合。用接種環將菌體塗成直徑約1cm的均勻薄層。注意,取菌量不宜過大,一面造成軍體重疊。
2、乾燥
放在桌面上,待其自然乾燥。
3、固定
將已乾燥的塗片標本向上,在火焰上透過3-4次固定。其目的是殺死細菌;使菌體蛋白質凝固,菌體牢固粘附於載玻片上,染色時不被染液或水沖掉;增加菌體對染料的結合力,使圖片易著色。
4、染色
在塗片上滴加染料1-2滴,使其佈滿塗菌部分,染色1分鐘。
5、沖洗
斜置玻片,傾去染液。用水輕輕衝去染液,至流水變清。注意水流不能直接沖洗塗菌處,以免將塗菌沖洗掉。
6、吸乾
用吸水紙輕輕吸去玻片上的水分,乾燥後鏡檢。
二、酵母菌製片及簡單染色。
水—碘液浸片法。將革蘭氏染色用碘液用水稀釋4倍後,滴加一滴於載破片中央,無菌操
作取少許菌體置於染色中混勻,蓋上破片後鏡劍。
三、放線菌製片方法(插片法)
1、在馬鈴薯浸汁瓊脂培養基平板上,劃線接入少量放線菌的孢子,在接種線旁傾斜地插入無菌蓋玻片,於28-30℃培養。
2、培養3~4天后,菌絲沿著蓋玻片向上生長,待菌絲長好後,取出蓋玻片放在乾淨的載玻片上,置於顯微鏡下觀察。
四、黴菌製片法
水浸製片法:
1、在載玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液或蒸餾水。
2、用解剖針從生長有黴菌的斜面挑取少量帶有孢子的黴菌菌絲,用50%的乙醇浸潤,再用蒸餾水將浸過的菌絲洗一下,然後放入載玻片上的液滴中,仔細地用解剖針將菌絲分散開來。(也可省略酒精和水浸潤,洗滌)
3、注意取菌時,毛黴和根黴用解剖針挑取少量菌絲即可,青黴和黑麴黴和培養基結合緊密,不易挑取,可連培養基一起挑取,再在染液中分離菌絲。青黴和麴黴的培養時間不宜過長,一般為2-2.5天,以免菌絲與培養基不好剝離。
4、蓋上蓋玻片(勿使產生氣泡,且不要再移動蓋玻片)。(黑麴黴不易觀察到足細胞)
5、鏡檢:先用低倍鏡,必要時轉換高倍鏡鏡檢並記錄觀察結果。