熒光定量PCR用10ul反應成熒光定量PCR是透過熒光染料或熒游標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時線上監控反應過程，結合相應的軟體可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。|||原理不同：熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr透過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量，一般是紫外光。反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小，熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通pcr必須電泳。結果：熒光定量可以實現精確定量，普通pcr則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通pcr無法實現的。|||這個還真不大清楚|||貌似前者是定量，後者屬於半定量。|||簡單的講PCR技術最早是用於擴增一段特異的PCR片段，用於克隆、測序等實驗，後來也將其用於樣本中特異的PCR片段有無或非很粗的相對定量，而熒光定量PCR技術則是為了測定樣本中特異的PCR片段相對及絕對量，是一種測定特異的PCR片段含量的方式。如測定病人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人講過普通PCR後，透過電泳也可以進行定量，其實是將PCR產物的定量與PCR樣本中模板定量相混了。近兩年沒有人再講這類的話了。|||引物設計是sybr定量PCR法的最大難點，機會好的話，設計一對引物就能得到很好的結果，機會不好的話7、8對引物也出不來，我就遇到過這樣的問題，我在prime5.0上設計了8對引物，符合實驗要求的一對也沒有，我把退火溫度提高到了68度也沒能把引物二聚體搞定，後來我想通了，可能我這對引物把其它序列擴增出來了，而且擴增效率很高（我一個同學設計了十幾對才找到一對好用的）。記住primer5.0設計出來的100%好的引物，到了定量PCR上不一定好使，這是我最大的經驗。定量pCR的引物對匹配度要求不高，我現在使用的引物就有幾個鹼基不匹配，但實驗結果很好。有一個辦法可以幫助我們繞過引物設計這道坎，直接到羅氏網站上專區上找引物。羅氏網站線上有一個引物設計軟體，你只要找好你目的基因的種屬，輸入你的片段序列就可以得到你要的引物。這個軟體有很大的好處，他會自動地把你的種屬序列背景扣除，最大限度地去除引物二聚體產生的可以。
熒光定量PCR用10ul反應成熒光定量PCR是透過熒光染料或熒游標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時線上監控反應過程，結合相應的軟體可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。|||原理不同：熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr透過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量，一般是紫外光。反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段。如果不需要檢測產物分子量大小，熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析，普通pcr必須電泳。結果：熒光定量可以實現精確定量，普通pcr則不行。熒光定量體現可以看到整個擴增過程，可以看到擴增效率，溶解溫度，直接得到的標準曲線等，這些是普通pcr無法實現的。|||這個還真不大清楚|||貌似前者是定量，後者屬於半定量。|||簡單的講PCR技術最早是用於擴增一段特異的PCR片段，用於克隆、測序等實驗，後來也將其用於樣本中特異的PCR片段有無或非很粗的相對定量，而熒光定量PCR技術則是為了測定樣本中特異的PCR片段相對及絕對量，是一種測定特異的PCR片段含量的方式。如測定病人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人講過普通PCR後，透過電泳也可以進行定量，其實是將PCR產物的定量與PCR樣本中模板定量相混了。近兩年沒有人再講這類的話了。|||引物設計是sybr定量PCR法的最大難點，機會好的話，設計一對引物就能得到很好的結果，機會不好的話7、8對引物也出不來，我就遇到過這樣的問題，我在prime5.0上設計了8對引物，符合實驗要求的一對也沒有，我把退火溫度提高到了68度也沒能把引物二聚體搞定，後來我想通了，可能我這對引物把其它序列擴增出來了，而且擴增效率很高（我一個同學設計了十幾對才找到一對好用的）。記住primer5.0設計出來的100%好的引物，到了定量PCR上不一定好使，這是我最大的經驗。定量pCR的引物對匹配度要求不高，我現在使用的引物就有幾個鹼基不匹配，但實驗結果很好。有一個辦法可以幫助我們繞過引物設計這道坎，直接到羅氏網站上專區上找引物。羅氏網站線上有一個引物設計軟體，你只要找好你目的基因的種屬，輸入你的片段序列就可以得到你要的引物。這個軟體有很大的好處，他會自動地把你的種屬序列背景扣除，最大限度地去除引物二聚體產生的可以。