質粒的提取方法：
一般用鹼裂解法。
原理
質粒（plasmid）是一種染色體外的穩定遺傳因子，具有雙鏈閉環結構的DNA分子。它具有自主複製能力，能使子代細胞保持它們恆定的複製數，可表達它攜帶的遺傳資訊。目前，質粒已廣泛用作基因工程中目的基因的運載工具——載體。
質粒DNA的提取是依據質粒DNA分子較染色體DNA分子小，且具有超螺旋共價閉合環狀的特點，從而將質粒DNA與大腸桿菌染色體DNA分離。現在常用的方法有：鹼裂解法、密度梯度離心法、煮沸裂解法等。實驗室普遍採用的鹼裂解法具有操作簡便、快速、得率高的優點。其主要原理：利用染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離的目的。在鹼變性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋解開而變性，質粒DNA氫鍵也大部分斷裂，雙螺旋也有部分解開，但共價閉合環狀結構的兩條互補鏈不會完全分離，當pH=4.8的乙酸鈉將其pH調到中性時，變性的質粒DNA又恢復到原來的構型，而染色體DNA不能復性，形成纏繞的緻密網狀結構，離心後，由於浮力密度不同，染色體DNA與大分子RNA、蛋白質-SDS複合物等一起沉澱下來而被除去。
操作步驟
一、培養細菌
將帶有質粒的大腸桿菌接種於LB平板培養基上，37℃×24h， 然後從平板上挑取單菌落，接種於5mL液體培養基中，37℃×12h。
二、提取步驟
1、將菌液移入1.5ml 離心管，8 000 rpm×1min，倒置於濾紙上，徹底除去殘液。
2、加入100 ul預冷的溶液Ⅰ，用渦旋震盪器充分懸浮菌體。
3、加入4 ul RNase，室溫×2 min。
4、加入200 ul溶液Ⅱ，快速顛倒，溫和混勻，冰浴5min。此時溶液應非常粘稠。
5、加入150 ul 預冷的溶液Ⅲ，溫和混勻（此時應有可見沉澱），冰浴5 min。
6、12 000 rpm×5min。轉移上清液至另一1.5ml離心管中。
7、上清液加入2倍體積預冷的無水乙醇，混勻，-20℃×20min。
8、12 000 rpm×5min，徹底除去殘液。
9、加入500 ul 70%乙醇洗DNA沉澱。3 000 rpm×1 min，徹底揮發除去乙醇。
10、加入40 ul ddH2O溶解DNA，待用。（或用TE溶解，-20℃儲存）。
質粒的提取方法：
一般用鹼裂解法。
原理
質粒（plasmid）是一種染色體外的穩定遺傳因子，具有雙鏈閉環結構的DNA分子。它具有自主複製能力，能使子代細胞保持它們恆定的複製數，可表達它攜帶的遺傳資訊。目前，質粒已廣泛用作基因工程中目的基因的運載工具——載體。
質粒DNA的提取是依據質粒DNA分子較染色體DNA分子小，且具有超螺旋共價閉合環狀的特點，從而將質粒DNA與大腸桿菌染色體DNA分離。現在常用的方法有：鹼裂解法、密度梯度離心法、煮沸裂解法等。實驗室普遍採用的鹼裂解法具有操作簡便、快速、得率高的優點。其主要原理：利用染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離的目的。在鹼變性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋解開而變性，質粒DNA氫鍵也大部分斷裂，雙螺旋也有部分解開，但共價閉合環狀結構的兩條互補鏈不會完全分離，當pH=4.8的乙酸鈉將其pH調到中性時，變性的質粒DNA又恢復到原來的構型，而染色體DNA不能復性，形成纏繞的緻密網狀結構，離心後，由於浮力密度不同，染色體DNA與大分子RNA、蛋白質-SDS複合物等一起沉澱下來而被除去。
操作步驟
一、培養細菌
將帶有質粒的大腸桿菌接種於LB平板培養基上，37℃×24h， 然後從平板上挑取單菌落，接種於5mL液體培養基中，37℃×12h。
二、提取步驟
1、將菌液移入1.5ml 離心管，8 000 rpm×1min，倒置於濾紙上，徹底除去殘液。
2、加入100 ul預冷的溶液Ⅰ，用渦旋震盪器充分懸浮菌體。
3、加入4 ul RNase，室溫×2 min。
4、加入200 ul溶液Ⅱ，快速顛倒，溫和混勻，冰浴5min。此時溶液應非常粘稠。
5、加入150 ul 預冷的溶液Ⅲ，溫和混勻（此時應有可見沉澱），冰浴5 min。
6、12 000 rpm×5min。轉移上清液至另一1.5ml離心管中。
7、上清液加入2倍體積預冷的無水乙醇，混勻，-20℃×20min。
8、12 000 rpm×5min，徹底除去殘液。
9、加入500 ul 70%乙醇洗DNA沉澱。3 000 rpm×1 min，徹底揮發除去乙醇。
10、加入40 ul ddH2O溶解DNA，待用。（或用TE溶解，-20℃儲存）。