一·第二代聚合酶兩步法（ PV，En Vision)
PV－9000是2001年投入美國市場的，它是將二抗抗體分子的單價Fab段與酶聚合在一起，與一抗結合後，直接用底物進行顯色的方法。此方法由於簡單、快速、敏感性強且避免了內源性生物素所造成的背景染色，以有逐漸取代其他免疫酶組織化學檢測方法的趨勢。
PV法操作流程
1石蠟切片脫蠟至PBS。
2 0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室溫孵育20min。
3 抗原修復。
4滴加適當稀釋的一抗370C 60min或40C過夜。
5 PBS洗滌。
6 酶標記二抗370C 30min或室溫60min。
7 DAB(0.04%)顯色（鏡檢控制），水洗、復染、封片
二·sp法是一抗＋生物素化二抗＋HRP標記的鏈黴卵白素（HRP標記的親和素）
一般的sp法步驟啊,具體如下：
1.烤片，68℃，20分鐘,
2. 常規二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min；
4. 抗原修復:置0.01M枸櫞酸緩衝液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩衝液代替一抗作陰性對照）；
滴加生物素標記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標記的鏈黴素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應染色，自來水充分沖洗後，
蘇木素復染，常規脫水，透明，乾燥，封片。
三·檢測試劑盒
四·建議選SP，亦可根據實驗室習慣及在組織中的表達情況來定
一·第二代聚合酶兩步法（ PV，En Vision)
PV－9000是2001年投入美國市場的，它是將二抗抗體分子的單價Fab段與酶聚合在一起，與一抗結合後，直接用底物進行顯色的方法。此方法由於簡單、快速、敏感性強且避免了內源性生物素所造成的背景染色，以有逐漸取代其他免疫酶組織化學檢測方法的趨勢。
PV法操作流程
1石蠟切片脫蠟至PBS。
2 0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室溫孵育20min。
3 抗原修復。
4滴加適當稀釋的一抗370C 60min或40C過夜。
5 PBS洗滌。
6 酶標記二抗370C 30min或室溫60min。
7 DAB(0.04%)顯色（鏡檢控制），水洗、復染、封片
二·sp法是一抗＋生物素化二抗＋HRP標記的鏈黴卵白素（HRP標記的親和素）
一般的sp法步驟啊,具體如下：
1.烤片，68℃，20分鐘,
2. 常規二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min；
4. 抗原修復:置0.01M枸櫞酸緩衝液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩衝液代替一抗作陰性對照）；
滴加生物素標記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標記的鏈黴素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應染色，自來水充分沖洗後，
蘇木素復染，常規脫水，透明，乾燥，封片。
三·檢測試劑盒
四·建議選SP，亦可根據實驗室習慣及在組織中的表達情況來定