澱粉被澱粉水解,切斷澱粉鏈的α-1,4糖苷鍵,對碘呈藍紫色的反應消失,這種呈色消逝的速度可以表示水解的程度,因而能衡量酶的活力。
操作方法
1、取試管1支,加20毫升2%澱粉,混勻,在30℃水浴中,使管內溫度達到30℃。
2、將澱粉酶0.5ml加到30℃的澱粉液中,混勻,在30℃水浴中保溫,自加入記時,經5分鐘後取反應液1毫升,加入盛有5毫升稀碘液的試管中。混勻,目測比色,每隔一定時間重複測定,直至呈色與標準比色顏色相同為止,記錄反應進行的時間。
3、計算。在上述條件下,每一小時催化1毫升2%可溶性澱粉水解的酶量,定為一個酶活力單位。
試劑和器材
一、試劑
(1)碘原液:稱取碘11克,碘化鉀22克,加水溶解,稀釋至500毫升。
(2)稀碘液:取碘原液2毫升,加碘化鉀20克,稀釋至500毫升,此試劑隨配隨用。
(3)2%澱粉液:稱取乾燥過的可溶性澱粉2克,加5毫升蒸餾水,攪拌混和,再徐徐傾入70毫升煮沸的蒸餾水中。繼續煮沸2分鐘,冷卻至室溫,加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液(PH為6)
(4)檸檬酸緩衝液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O)45.23克,檸檬酸(C6H8O7?H2O)8.068克,加水溶解,稀釋至1000毫升。
(5)標準比色液:稱取氯化鈷(CoCL2?6H2O)25克和重鉻酸鉀3.34克溶於100毫升0.01NHCL,其五倍稀釋作標準。
(6)樣品:細菌-α澱粉酶
澱粉被澱粉水解,切斷澱粉鏈的α-1,4糖苷鍵,對碘呈藍紫色的反應消失,這種呈色消逝的速度可以表示水解的程度,因而能衡量酶的活力。
操作方法
1、取試管1支,加20毫升2%澱粉,混勻,在30℃水浴中,使管內溫度達到30℃。
2、將澱粉酶0.5ml加到30℃的澱粉液中,混勻,在30℃水浴中保溫,自加入記時,經5分鐘後取反應液1毫升,加入盛有5毫升稀碘液的試管中。混勻,目測比色,每隔一定時間重複測定,直至呈色與標準比色顏色相同為止,記錄反應進行的時間。
3、計算。在上述條件下,每一小時催化1毫升2%可溶性澱粉水解的酶量,定為一個酶活力單位。
試劑和器材
一、試劑
(1)碘原液:稱取碘11克,碘化鉀22克,加水溶解,稀釋至500毫升。
(2)稀碘液:取碘原液2毫升,加碘化鉀20克,稀釋至500毫升,此試劑隨配隨用。
(3)2%澱粉液:稱取乾燥過的可溶性澱粉2克,加5毫升蒸餾水,攪拌混和,再徐徐傾入70毫升煮沸的蒸餾水中。繼續煮沸2分鐘,冷卻至室溫,加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩衝液(PH為6)
(4)檸檬酸緩衝液:稱取磷酸氫二鈉(Na2HPO4?12H2O)45.23克,檸檬酸(C6H8O7?H2O)8.068克,加水溶解,稀釋至1000毫升。
(5)標準比色液:稱取氯化鈷(CoCL2?6H2O)25克和重鉻酸鉀3.34克溶於100毫升0.01NHCL,其五倍稀釋作標準。
(6)樣品:細菌-α澱粉酶