載體(Vector)是把外源DNA(目的基因)匯入宿主細胞,使之傳代、擴增、表達的工具.載體有質粒(plasmid)、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質粒(粘粒)、病毒等.載體具有能自我複製;有可選擇的,便於篩選、鑑定的遺傳標記;有供外源DNA插入的位點;本身體積小等特徵.
質粒存在於多種細菌,是染色體(核)以外的獨立遺傳因子,由雙鏈環狀DNA組成,幾乎完全裸露,很少有蛋白質結合.質粒有嚴緊型和鬆弛型之分.嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒.而鬆弛型由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,複製更多的質粒.質粒經過改造品種繁多,常用的有pBR322、pUC系列等.這些質粒都含有多個基本基因,如複製起動區(複製原點Ori),便於複製擴增;抗抗生素標記(抗氨芐青黴素Apr、抗四環素Tcr等)或大腸埃希菌部分乳糖操縱子(E.coli
LacZ)等,便於基因重組體的篩選;基因發動子(乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱子Trp等)和轉錄終止序列,便於插入的外源基因轉錄、翻譯表達.質粒上還有許多限制性內切酶的切點,即基因插入位點,又叫基因重組位點,基因克隆位點.
常用噬菌體載體有單鏈噬菌體M13系統;雙鏈噬菌體系統.噬菌體應和相應的宿主細胞配合使用.以上載體各有特點,便於選擇,靈活應用.
載體(Vector)是把外源DNA(目的基因)匯入宿主細胞,使之傳代、擴增、表達的工具.載體有質粒(plasmid)、噬菌體、單鏈絲狀噬菌體和粘性末端質粒(粘粒)、病毒等.載體具有能自我複製;有可選擇的,便於篩選、鑑定的遺傳標記;有供外源DNA插入的位點;本身體積小等特徵.
質粒存在於多種細菌,是染色體(核)以外的獨立遺傳因子,由雙鏈環狀DNA組成,幾乎完全裸露,很少有蛋白質結合.質粒有嚴緊型和鬆弛型之分.嚴緊型由DNA多聚酶Ⅲ複製,一個細胞可複製1-5個質粒.而鬆弛型由DNA多聚酶Ⅰ複製,一個細胞可複製30-50個質粒,如果用氯黴素可阻止蛋白質合成,使質粒有效利用原料,複製更多的質粒.質粒經過改造品種繁多,常用的有pBR322、pUC系列等.這些質粒都含有多個基本基因,如複製起動區(複製原點Ori),便於複製擴增;抗抗生素標記(抗氨芐青黴素Apr、抗四環素Tcr等)或大腸埃希菌部分乳糖操縱子(E.coli
LacZ)等,便於基因重組體的篩選;基因發動子(乳糖操縱子Lac、色氨酸操縱子Trp等)和轉錄終止序列,便於插入的外源基因轉錄、翻譯表達.質粒上還有許多限制性內切酶的切點,即基因插入位點,又叫基因重組位點,基因克隆位點.
常用噬菌體載體有單鏈噬菌體M13系統;雙鏈噬菌體系統.噬菌體應和相應的宿主細胞配合使用.以上載體各有特點,便於選擇,靈活應用.