原核生物的蛋白質合成分為四個階段：氨基酸的活化、肽鏈合成的起始、延伸和終止。①氨基酸的活化：遊離的氨基酸必須經過活化以獲得能量，才能參與蛋白質的合成，活化反應由氨醯tRNA合成酶催化，最終氨基酸連線在tRNA3ˊ端AMP的3ˊ-OH上，合成氨醯-tRNA。②肽鏈合成的起始：首先IF1和IF3與30S亞基結合，以阻止大亞基的結合；接著，IF2和GTP與小亞基結合，以利於隨後的起始tRNA的結合；形成的小亞基複合物經由核糖體結合點附著在mRNA上，起始tRNA和AUG起始密碼子配對並釋放IF3，並形成30S起始複合物。大亞基與30S起始複合物結合，替換IF1和IF2+GDP，形成70S起始複合物。這樣在mRNA正確部位組裝成完整的核糖體。③肽鏈的延伸：延伸分三步進行，進位：負載tRNA與EF-Tu和GTP形成的複合物被運送至核糖體，GTP水解，EF-TuGDP釋放出來，在EF-Ts和GTP的作用下，EF-Tu GDP可以再次利用。轉肽：肽醯轉移酶將相鄰的兩個氨基酸相連形成肽鍵，該過程不需要能量的輸入。移位：移位酶（EF-G）利用GTP水解釋放的能量，使核糖體沿mRNA移動一個密碼子，釋放出空載的tRNA並將新生肽鏈運至P位點。④肽鏈的終止與釋放：釋放因子（RF1或RP2）識別終止密碼子，並在RP3的作用下，促使肽醯轉移酶在肽鏈上加上一個水分子並釋放肽鏈。核糖體釋放因子有助於核糖體亞基從mRNA上解離。